Bewertung der schützenden Rolle eines säureaktivierten Chaperons bei E. coli unter Säurestress

Nehmen Sie rekombinante E.-coli-Kulturen , die empfindlich auf Umweltstress reagieren.

Die Testkultur enthält ein Plasmid, das für einen säureaktivierten Chaperon codiert, während die Kontrollkultur nur das Plasmid-Rückgrat besitzt.

Inokulieren Sie einzelne Kolonien in antibiotika-supplementierte Medien, um die Plasmidretention sicherzustellen, und inkubieren Sie, um das Bakterienwachstum zu fördern.

Verdünnen Sie die Kulturen in frischen Medien, die das Antibiotikum und einen Induktor enthalten, um die Expression des Chaperons zu aktivieren.

Wachsen Sie die Kulturen bis zur Mitte der Logaritma-Phase und verdünnen Sie dann, um eine bestimmte optische Dichte zu erreichen.

Fügen Sie Säure hinzu, um den pH-Wert zu senken und so Säurestress auszulösen.

In der Testkultur aktivieren saure Bedingungen das Chaperon, das zelluläre Proteine stabilisiert und ihre Aggregation verhindert. In der Kontrollkultur führt das Fehlen des Begleiters dazu, dass zelluläre Proteine denaturieren und aggregieren.

Gib eine Base hinzu, um den pH-Wert zu neutralisieren und den Säurestress zu stoppen.

Überwachen Sie das Bakterienwachstum, indem Sie die optische Dichte über die Zeit messen.

Das verstärkte Wachstum in der