Gewinnung von genomischer DNA aus Pflanzenblattgewebe, das mit pathogenen Bakterien infiziert ist

Nehmen wir ein Blatt, das mit Candidatus liberibacter, einem pathogenen Bakterium, infiziert ist.

Schneiden Sie es in Stücke, frieren Sie es in flüssigem Stickstoff ein und mahlen Sie es, um die Pflanzenzellen zu zerreißen und deren Inhalt, einschließlich der Bakterien, freizusetzen.

Fügen Sie einen Kern-Lysepuffer hinzu und mischen Sie gründlich.

Inkubieren Sie bei hoher Temperatur, um die Membranen zu lysieren, wodurch genomische DNA aus Pflanzenkernen und Bakterienzellen freigesetzt wird.

Fügen Sie das RNase-Enzym hinzu, wenden Sie die Röhre um, um zu mischen, und inkubieren, um RNA abzubauen.

Fügen Sie eine Protein-Niederschlagslösung hinzu und mischen Sie diese zur Förderung der Proteinaggregation. Zentrifugiere zu Pelletproteinen und Zellresten.

Übertragen Sie das Supernatant in ein Rohr mit Isopropanol und mischen Sie, um die DNA in sichtbare Stränge auszufällen. Zentrifuge, um die DNA zu pelletieren.

Waschen Sie die Pellets mit Ethanol, um Verunreinigungen zu entfernen, lassen Sie sie an der Luft trocknen und die DNA rehydrieren.

Inkubieren Sie bei hoher Temperatur, um die DNA löslich zu machen, und laden Sie dann eine Probe in eine Mikrocuvette.

Mit einem Spektrophotometer wird die