Soft Agar Overlay Assay zur Erkennung bakteriiozinvermittelter Tötung bei Pseudomonas syringae
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:17 Min. • November 28th, 2025
Beginnen Sie mit einem geschmolzenen, weichen Agar, der bei warmer Temperatur gehalten wird.
Inokulieren Sie eine Pseudomonas-Syringae-Kultur , den Teststamm, in den Agar.
Dann kurz vortexen, um die Zellen gleichmäßig zu verteilen.
Gießen Sie die Mischung auf eine verfestigte Agarplatte und verteilen Sie sie gleichmäßig.
Schließen Sie den Deckel und lassen Sie ihn fest werden.
Entdecken Sie ein gefiltertes Supernatant auf der Oberfläche des erstarrten Agars.
Der Supernatant enthält Bakteriocin, ein antibakterielles Molekül, das aus einem stressinduzierten Spenderstamm P. syringae gewonnen wird.
Inkubieren Sie die Platte, um das bakterielle Wachstum und die Diffusion des Bakteriocins durch den Agar zu ermöglichen.
Das Bakteriocin bindet an spezifische Oberflächenrezeptoren des Teststamms und stört dessen Membran, was zum Zelltod führt.
Dies führt zur Bildung einer klaren Zone auf dem Agar, die den Bereich anzeigt, in dem der Teststamm durch das antibakterielle Molekül Bakteriocin abgetötet wurde.
Verdünne die Kultur von 1 bis 100 in frische KB. Inkubieren Sie die Kultur drei bis vier Stunden und schütteln Sie sie bei Zimmertemperatur. Anschließend bereiten Sie sterilisiertes Wasseragar vor, i
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