Isolierung stressadaptierter Bakterien durch Einzelkolonie-Selektion

Nehmen Sie eine Bakterienkultur, die über einen längeren Zeitraum unter Stress gezüchtet wurde.

Der langfristige Stress führt zu spontanen Mutationen, natürlicher Selektion und der Vermehrung stressangepasster Bakterien.

Um diese Bakterien zu isolieren, werden Sie ein kleines Volumen der Kultur auf eine Agarplatte mit demselben Stressor anbringen und inkubieren.

Der Stressor sorgt nur für das Wachstum stressangepasster bakterieller Kolonien.

Wählen Sie eine einzelne Kolonie aus, um die genetische Reinheit zu erhalten, und impfen Sie das flüssige Medium mit dem Stressor.

Inkubieren Sie durch Schütteln, um das Wachstum stressangepasster Bakterien zu fördern.

Verwenden Sie ein kleines Volumen der Kultur, um frisches Medium mit dem Stressor zu impfen.

Gleichzeitig sollten Sie ein anderes Medium, das den Stressor enthält, mit Wildtyp- oder Nicht-Stress-adaptierten Bakterien impfen.

Missen Sie die Absorption in regelmäßigen Abständen als Indikator für das Bakterienwachstum.

Vergleichen Sie das Wachstumsprofil, um eine erfolgreiche Isolierung stressangepasster Bakterien sicherzustellen.

Bereite ein 1,6%iges Agarplattenmedium vor, das denselben Spannungsfaktor bei derselben Konzentration wie im Medium enthält. Platt 0,1 Milliliter der Austrittskultur aus dem Chemostat und inkubiere bei 37 Grad Celsius für 16 Stunden. Nach der Inkubation entnehmen Sie einzelne Kolonien mit einem sterilen Zahnstocher von der Platte und inokulieren Sie sie in 15-Milliliter-Reagenzgläser, die denselben Stressor und in derselben mittleren Konzentration wie im Chemostat enthalten.

Inkubiere sechs Stunden lang. Geben Sie einen Milliliter der Kulturbrühe in eine 250-Milliliter-Erlenmeyer-Flasche mit 50 Millilitern Medium um. Ernten Sie jede Stunde 0,5 Milliliter der Kulturbrühe und messen Sie die optische Dichte bei 600 Nanometern.

Vergleichen Sie die Wachstumsrate des adaptierten Stamms mit der des Wildtyp-Stamms gegeben den Stressor