Selektive Anreicherung und Isolierung ölabbauender Meeresbakterien aus Meerwasserproben

Beginnen Sie mit einer Meerwasserprobe, die verschiedene mikrobielle Gemeinschaften enthält, darunter Bakterien, die in der Lage sind, Kohlenwasserstoffe abzubauen.

Führen Sie serielle Verdünnungen der Probe in Kochsalzlösung durch, um die mikrobielle Dichte zu reduzieren.

Fügen Sie Rohöl dem sterilen destillierten Wasser hinzu und rühren Sie das Gemisch, um die Kohlenwasserstoffbestandteile des Öls teilweise zu lösen.

Lassen Sie die Mischung absinken und trennen Sie sie in wasserlösliche und wasser-unlösliche Ölfraktionen.

Bereiten Sie selektive Agarplatten vor, wobei jede Ölfraktion als einzige Kohlenstoffquelle dient, um Bakterien anzureichern, die lösliche oder hydrophobe Kohlenwasserstoffe abbauen.

Die verdünnten Meerwasserproben werden auf das selektive Medium gelegt und bei Umgebungstemperatur inkubiert.

Kolonien, die entstehen, sind auf Enzyme wie Hydroxylasen und Dioxygenasen angewiesen, um Kohlenwasserstoffe zu metabolisieren.

Wählen Sie morphologisch unterschiedliche Kolonien aus und legen Sie sie auf frisches Material mit derselben Ölfraktion um, um reine Kulturen von kohlenwasserstoffabbauenden Bakterien zu erhalten.

Diese Methode ermöglicht die selektive Isolierung von ölabbauenden Meeresbakterien.

Um ein minimales Medium mit einer Öl-Wasser-löslichen Fraktion und einer Öl-Wasser-unlöslichen Fraktion als einzige Kohlenstoffquelle herzustellen, geben Sie 1–2 % Rohöl zu 500 Millilitern sterilem destilliertem Wasser in einer Filterkolben mit einem Ventil am Boden zu. Halten Sie die Flasche 48 Stunden lang bei 24 bis 28 Grad Celsius bei 150 x g unter ständigem Rühren. Danach stellen Sie den Kolben auf eine stabile Oberfläche und warten Sie 10 bis 20 Minuten, damit sich lösliche und unlösliche Fraktion trennen können.

Dann öffnen Sie die untere Filterkolben, um die öl-wasserlösliche Fraktion in eine neue sterile Flasche zu überführen, wodurch die Öl-Wasser-unlösliche Fraktion gerettet wird. Dann bereiten Sie zwei Flaschen Bushnell Haas Agar Minimum Medium vor. Autoklav es.

Kombiniert man mit dem öl-wasserlöslichen Anteil als einzige Kohlenstoffquelle, um 500 Milliliter Agarmedium zu erzeugen. Mach dasselbe mit der Öl-Wasser-unlöslichen Fraktion und übertrage etwa 25 Milliliter jedes Mediums auf einzelne Petrischalen. Um ölabbauende Bakterien zu isolieren, verwenden Sie zuvor verdünnte Proben erneut und pipettieren Sie 100 Mikroliter jeder Verdünnung auf die Petrischalen mit Agarmedium und verplatten Sie sie.

Denken Sie daran, negative Kontrollen für Ihre Platten zu behalten. Inkubieren Sie die Schüssel ein bis drei Tage lang bei der Zieltemperatur und wiederholen Sie die Isolationsverfahren wie zuvor.