JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:51 Min. • November 28th, 2025
Nehmen wir die Kultur eines gentechnisch veränderten Bakteriums, das so konstruiert wurde, dass es ein Plasmid enthält, das ein sekretorisches fluoreszierendes Protein exprimiert und Antibiotikaresistenz verleiht.
Inokulieren Sie es in ein Medium mit dem Antibiotikum und inkubieren Sie es mit Schütteln, um das Bakterienwachstum zu fördern.
Das Antibiotikum sorgt dafür, dass nur Zellen, die das Plasmid speichern, sich vermehren können.
Sobald die Kultur die gewünschte Dichte erreicht hat, wird sie an ein automatisiertes Flüssigkeitshandhabungssystem übergeben.
Eine Tiefbrunnenplatte enthält unterschiedliche Konzentrationen essentieller Nährstoffe, die in eine Mikrotiterplatte gegeben werden, um unterschiedliche Medienformulierungen zu erzeugen.
Inokulieren Sie jeden Brunnen der Platte mit der Bakterienkultur.
Versiegeln Sie die Platte und setzen Sie sie in einen Mikrobioreaktor, der eine gleichmäßige Temperatur und Belüftung aufrechterhält.
Die unterschiedlichen Formulierungen führen zu Variationen im Bakterienwachstum und der Sekretion fluoreszierender Proteine.
Ein optischer Sensor im Gerät misst Zelldichte und Fluoreszenz, was den Vergleich von bakteriellem Wachstum und fluoreszierender Proteinproduktion über die Medienformulierungen hinweg ermöglicht.
Sterilisieren Sie Tiefbrunnenplatten für die Lagerung der Lagerlösung auf einem Arbeitstisch, indem Sie die Platten mit 70 Prozent Ethanol abwischen und anschließend in einer laminaren Flusshaube trocknen. Beginnen Sie mit der Saatgutkultur, indem Sie 50 Milliliter BHI-Medium impfen, das 25 Milligramm Kanamycin pro Liter mit einem Aliquot aus der funktionierenden Zellbank enthält. Lege alle notwendigen Laborutensilien auf den robotischen Arbeitstisch und gieße Brühlösung in die entsprechenden Laborutensilien.
Dann beginnt der robotische Arbeitsablauf zur Medienvorbereitung, sodass der letzte Schritt, die Impfung, rechtzeitig zum Beginn der Saatgutkultur erreicht wird. Proben Sie die Samenkultur nach etwa zwei Stunden, um das Wachstum zu überwachen, indem die optische Dichte bei 600 Nanometern oder OD600 gemessen wird. Beobachten Sie das Wachstum weiterhin zu jeder Stunde.
Nach etwa fünf Stunden erreicht die Kultur einen ODvon 600 zwischen drei und vier Stunden und wird zur Impfung der Hauptkulturen verwendet. Platzieren Sie die Saatgutkultur auf den Arbeitstisch des Flüssigkeitsbehandlers und setzen Sie das Medienvorbereitungsprotokoll fort. Versiegeln Sie die Kultivierungs-Mikrotiterplatten nach der Impfung.
Als Nächstes legt man das versiegelte Kultivierungs-MTP in das Biolektor-Gerät. Dann starte das vordefinierte Kultivierungsprotokoll.