Langzeit-Kryokonservierung cyanobakterieller Stämme mit Glycerol oder Dimethylsulfoxid

Beginnen Sie damit, eine Schleife eines cyanobakteriellen Stamms auf ein Wachstumsmedium zu inokulieren. Inkubieren, damit die Zellen auf die gewünschte Dichte wachsen können.

Waschen Sie die Zellen durch Zentrifugation und entsorgen Sie den Supernatanten, der Reststoffwechsel und Ablagerungen enthält.

Setzen Sie das Pellet in einem kleinen Volumen Wachstumsmedium wieder auf, um eine konzentrierte Suspension zu erzeugen.

Mischen Sie einen Aliquot dieser Suspension mit Glycerol, einem Kryoprotektionsmittel, das die Membran stabilisiert und die Bildung von Eiskristallen beim Einfrieren verhindert.

Zu einem anderen Aliquot fügen Sie Dimethylsulfoxid hinzu, ein Kryoprotektionsmittel, das Zellen durchdringt und die Eisnukleation hemmt.

Lagern Sie die Proben bei niedrigen Temperaturen, wo die Stoffwechselaktivität stoppt und die Zellen über längere Zeiträume lebensfähig bleiben.

Zur Wiederbelebung wird eine kleine Menge der eingefrorenen Biomasse ohne Antibiotika und Streifen auf eine Agarplatte geschrubbt, um Stress zu reduzieren und die allmähliche Erholung zu unterstützen.

Diese Methode ermöglicht die langfristige Kryokonservierung und Wiederbelebung cyanobakterieller Stämme für zukünftige Studien.

Um die Stämme langfristig zu lagern, richten Sie eine frische Kultur des Stamms auf, indem Sie eine Schleife voller Zellen in 30 bis 50 Milliliter BG11-Medium inokulieren. Wachsen Sie die Kultur für drei bis vier Tage auf einen OD₇₅₀ , was 0,4 bis 0,7 entspricht.

Nach einmaligem Waschen von BG11 wird das Pellet in etwa zwei Millilitern BG11 wieder suspendiert. Gib 0,8 Milliliter der konzentrierten Zellen in ein Rohr. Dann gib 0,2 Milliliter 80% filtersterilisiertes Glycerol dazu.

In ein anderes Rohr geben Sie 0,93 Milliliter konzentrierte Zellen und 0,07 Milliliter DMSO. Lagere beide Röhren bei minus 80 Grad Celsius. Um die Stämme wiederzubeleben, entfernen Sie das Rohr und verwenden Sie einen stumpfen Zahnstocher, um einige Zellen ohne Antibiotika auf eine Agarplatte zu kratzen. Dann benutze eine sterile Schleife, um wie gewohnt auszulaufen.