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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:42 Min. • January 30th, 2026
Beginnen Sie damit, eine Lösung mit bakteriellen 16S-rRNA-spezifischen Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierungssonden (FISH) zu einem Objektträger zu geben, der die von Bakterien besiedelten Maus-Darmabschnitte enthält.
Setzen Sie einen Deckdeckel, um die flüssigkeitshaltigen Sonden zu verteilen und Verdunstung zu verhindern.
Inkubieren Sie den Objektträger in einer befeuchteten Kammer bei erhöhter Temperatur.
Dadurch entfaltet sich die RNA-Sekundärstruktur und ermöglicht so die Hybridisierung der Sonde mit komplementären Sequenzen in bakterieller 16S-rRNA.
Entfernen Sie den Deckdeckel und inkubieren Sie den Schlitten in einem vorgewärmten Waschpuffer, um ungebundene Sonden zu entfernen.
Spülen Sie mit einem Phosphatpuffer, um den physiologischen pH-Wert zu erhalten.
Tragen Sie eine Gegenfarbe auf, die einen schleimspezifischen Farbstoff und einen Kernfarbe enthält, und inkubieren Sie.
Diese Farbstoffe binden selektiv an den Darmschleim sowie an die DNA von Bakterien- und Wirtszellen. Waschen Sie den Schlitten mit einem Puffer und montieren Sie die Deckdecken mit Montagemedium auf den Schlitten.
Beobachten Sie unter einem konfokalen Mikroskop unterschiedliche FISH-markierte Bakterien, Darmzelle
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