Aerosolabgabe von Mycobacterium tuberculosis bei Lungeninfektion in einem Mausmodell

Beginnen Sie mit einem gefrorenen Bestand von Mycobacterium tuberculosis, einem pathogenen Bakterium, das Lungentuberkulose verursacht.

Tauen Sie das Fläschchen auf und mischen Sie die Suspension vorsichtig, um bakterielle Klumpen zu verteilen und eine gleichmäßige Konzentration sicherzustellen.

Verdünnen Sie das erforderliche Volumen im sterilen Puffer, um ein standardisiertes Aerosolinokulum herzustellen.

Fesseln Sie eine Maus in einem Netzhalter, um die Bewegung zu begrenzen, und legen Sie sie in die versiegelte Aerosol-Expositionskammer.

Laden Sie das vorbereitete Inokulum in eine Spritze und injizieren Sie es in die an der Kammer angeschlossene Verneblereinheit.

Aktivieren Sie das Inhalationssystem, das Druckluft verwendet, um die Suspension in feine, atemfähige Tröpfchen zu vernebeln.

Diese Tröpfchen, die lebensfähige M. tuberculosis enthalten, verteilen sich in die Kammerluft.

Die bewusste Maus inhaliert das Aerosol, sodass lebensfähige Bakterien tief in die Lunge eindringen und eine Infektion auslösen können.

Das Mausmodell der pulmonalen Tuberkulose ist nun für weitere Studien bereit.

Beginnen Sie damit, die Bestände von Mycobacterium tuberculosis mit einem bekannten CFU-Titer zu erwärmen. Wenn die Zellen aufgetaut sind, verwenden Sie eine 1-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gauge-Nadel, um die Suspension vorsichtig fünfmal zu mischen, um die bakteriellen Klumpen zu zerstreuen und so die Bildung von Aerosolen zu vermeiden. Je nach gewünschter Infektionsdosis wird das erforderliche Volumen des mykobakteriellen Stocks in ein 50-Milliliter-Rohr mit sterilem PBS auf ein Endvolumen von 6 Millilitern übertragen. Als Nächstes werden die Versuchstiere einzeln in Fächer mit Netz gelegt. Platziere die Körbe in die runde Aerosolkammer und schließe den Deckel der Kammer.

Befestigen Sie die Venturi-Verneblereinheit an den drei Edelstahl-Steckschlüsselverbindungen. Aspirieren Sie die mykobakterielle Suspension in eine 10-Milliliter-Spritze, die mit einer 18-Gauge-Stumpfnadel versehen ist, und bringen Sie die Spritze in eine geschlossene Transportbox zur Aerosolkammer. Entfernen Sie nun den Schraubverschluss des Verneblers und sprühen Sie vorsichtig die Mykobakterien-Suspension in das Gerät, wobei Sie darauf achten, eine Aerosolbildung zu vermeiden.

Werfen Sie die Spritze in einen scharfen Behälter mit 2 % Buraton und verschließen Sie dann den Vernebler.

Bedienen Sie das Injektionsgerät.

Wenn der Zyklus abgeschlossen ist, bestätigen Sie, dass die Mykobakterien-Suspension vollständig vernebelt wurde.