JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:02 Min. • February 2nd, 2026
Nehmen Sie eine betäubte Maus mit Hautschnitten, die mit einem pathogenen Bakterium infiziert sind.
Das Bakterium ist genetisch so verändert, dass es ein Plasmid mit dem luxABCDE-Reportersystem enthält, das autonome Biolumineszenz ermöglicht.
Stellen Sie die Maus in eine Bauchlage auf der biolumineszenzbildenden Plattform.
An der Infektionsstelle codieren die LuxA - und LuxB-Gene des Bakteriums das Luciferase-Enzym, während die luxCDE-Gene Enzyme codieren, die langkettige fette Aldehyde synthetisieren, welche als Substrat für Luciferase dienen.
In Anwesenheit von Sauerstoff katalysiert die Luciferase die Oxidation ihres Kofaktors, des reduzierten Flavinmononukleotids, das dann mit dem langkettigen Fettaldehyd reagiert und blau-grünes Licht erzeugt.
Diese Biolumineszenz weist auf das Vorhandensein metabolisch aktiver Bakterien an der Infektionsstelle hin.
Mit dem Bildgebungssystem wird die Infektionsstelle abgebildet und die Intensität des Biolumineszenzsignals quantifiziert.
Für die In-vivo-Bildgebung der infizierten Wunden folgen Sie den Biosicherheitsprotokollen der Stufe zwei für den Transport der Mäuse zum und vom Bildgebungsinstrument und bringen Sie die narkosierte Maus in die Bauch
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