Isolierung von Bakterien aus dem Mücken-Mitteldarm

Beginnen Sie mit einem Objektträger, der eine betäubte erwachsene Mücke in einem Tropfen phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS enthält.

Entfernen Sie unter einem Seziermikroskop die Beine, Flügel und den Kopf der Mücke.

Schneiden Sie die Spitze des Bauches ab, um keine Schädigung des Verdauungstrakts zu vermeiden.

Sichern Sie den Thorax und das Bauchende und ziehen Sie dann vorsichtig den Verdauungstrakt heraus, um ihn zu entfernen.

Der extrahierte Verdauungstrakt umfasst den Mitteldarm, der für die Verdauung verantwortlich ist und verschiedene Darmbakterien beherbergt, die die Mückenphysiologie beeinflussen.

Bei höherer Vergrößerung werden die umliegenden Strukturen vorsichtig entfernt, um den Mitteldarm zu isolieren.

Übertragen Sie den isolierten Mitteldarm in eine frische Röhre mit PBS.

Homogenisiere den Mitteldarm, um die Bakterien in das PBS freizusetzen.

Verteile das verdünnte Homogenat auf einer Nähragarplatte.

Inkubieren Sie die Platte, damit bakterielle Kolonien wachsen können, was die mikrobielle Flora des Mücken-Mitteldarms darstellt.

Sezieren Sie die Mücke separat auf einem sterilen Glasträger mit einem Tropfen PBS. Entfernen Sie vorsichtig die Beine, Flügel und den Kopf der Mücke mit einer Pinzette.

Klemmen Sie die Brust der Mücke und den letzten Bauchbereich mit einer Pinzette zusammen und trennen Sie den Verdauungstrakt, um den Verdauungstrakt zu isolieren.

Verwenden Sie eine Pinzette, um die Ernte und den Malpighian-Schlauch aus dem Verdauungstrakt zu entfernen. Die Pflanze befindet sich vorne im Mitteldarm und wölbt sich nach der Aufnahme von Zuckerwasser. Malpighische Röhren sind eine Gruppe schlanker Ausscheidungsröhren an der Verbindung von Mitteldarm und Hinterdarm.

Geben Sie den dissektionierten Mitteldarm in ein EP-Rohr mit 200 Mikrolitern sterilem PBS-Puffer und mahlen Sie es mit dem sterilen Mahlmittelstoßer auf der supersauberen Werkbank. Serielle Verdünnung des Homogenats auf drei 10-fache Verdünnungen bei jeweils 50 Mikrolitern auf die LB-Agarplatte und anschließend die Streuplatte.

Inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad für ein bis zwei Tage, bis einzelne Kolonien sichtbar sind.