Live-Bildgebung des Makrophagenzelltods während einer mykobakteriellen Infektion in Zebrafisch-Embryonen

Beginnen Sie mit transgenen Zebrafisch-Embryonen, die fluoreszierend markierte Makrophagen exprimieren, montiert in niedrigschmelzender Agarose in einer Bildgebungsschale.

Diese Embryonen werden mit fluoreszierend markiertem Mycobacterium marinum durch intramuskuläre Mikroinjektion in das Mittelhirn infiziert, wodurch eine lokale Immunantwort ausgelöst wird.

Bedecken Sie die verfestigte Agarose mit Embryonalmedien, die Anästhetika enthalten, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten, sowie chemischen Inhibitoren zur Unterdrückung der Pigmentierung, um eine optische Klarheit für die Bildgebung zu gewährleisten.

Stellen Sie die Schale in die Umweltkammer eines hochauflösenden Konfokalmikroskops.

Mit hellem Feldlicht lokalisieren Sie die infizierte Region.

Aktivieren Sie die Fluoreszenzlaserkanäle, stellen Sie die Start- und Endpositionen des Z-Stacks ein und starten Sie die Zeitrafferbildgebung.

Stellen Sie sich das infizierte Makrophag vor, gefüllt mit fluoreszierenden Bakterien, während es rund und unbeweglich wird.

Dies deutet auf einen zytoskelettalen Zerfall und den Beginn des lytischen Zelltodes hin.

Im Laufe der Zeit schwillt und platzt der Makrophag, wobei zytoplasmatische Inhalte und int