Modellierung von Infektionen bei neonatalen Mäusen mit gekapselten biolumineszenten Bakterien

Beginnen Sie mit altersgerechten neonatalen Mauswelpen.

Heben Sie vorsichtig die Haut am Hinterkopf jedes Welpen an. Subkutan injizieren Sie einen Welpen mit einer niedrig konzentrierten Suspension pathogener Bakterien und einen anderen mit einer hochkonzentrierten Suspension.

Diese Bakterien produzieren ein biolumineszentes Operon, das das Luciferase-Enzym und dessen Substrat produziert und so eine autonome Lichtemission ermöglicht.

Eine schützende Polysaccharidkapsel umgibt die Bakterien und maskiert ihre Oberflächenantigene, wodurch die Erkennung durch die Immunzellen der Welpen verhindert wird.

Geben Sie die Welpen zur Nachsorge zu ihrer leiblichen Mutter zurück.

Die bakterielle Vermehrung an der Injektionsstelle löst eine Entzündung aus und erhöht die Gefäßdurchlässigkeit, was den Eindringen von Bakterien in den Blutkreislauf und die systemische Ausbreitung ermöglicht.

Setzen Sie die betäubten Welpen unter ein Lumineszenzbildgebungssystem.

Luciferase oxidiert das Substrat, um sichtbares Licht zu erzeugen, was die Visualisierung von Bakterien im Inneren der Jungtiere ermöglicht.

Nehmen Sie im Laufe der Zeit Bilder auf, um das Wachstum und die Ausbreitung von Bakterien bei Jungen zu vergleichen, die mit hohen und niedrigen Bakterienkonzentrationen impft sind.

Beginnen Sie damit, altersgleiche Welpen entweder in Hoch- oder Niedrigdosis-Wurfgruppen in einem Biosicherheits-Level-2-Schrank zu platzieren. Am postnatalen Tag 3 oder 4 sollten Sie das Gewicht aller Welpen vor der Impfung notieren.

Füllen Sie Insulinspritzen mit PBS oder dem hoch- oder niedrigdosierten E. Coli Lux Inokulum in den Biosicherheitsschrank setzen und die geladenen Spritzen auf Eis legen.

Legen Sie den Neugeborenen zur Injektion auf eine saubere Oberfläche im Biosicherheitsschrank und heben Sie die Haut im Nacken an, als wolle Sie den Welpen in den Nacken legen. Führen Sie die Nadelschrägung direkt unter die Haut in den Raum zwischen Haut und Muskel ein. Wenn die Nadel unter der Haut gespürt werden kann, injizieren Sie 50 Mikroliter des Impfstoffs und lassen Sie gleichzeitig den eingeklemmten Hautbereich frei, um Rückfluss zu verhindern. Dann entferne die Nadel langsam und vorsichtig.

Wenn alle Jungtiere auf die gleiche Weise injiziert wurden, bringen Sie die Jungtiere zurück zu ihren Muttern. Unmittelbar nach der Injektion und zu den entsprechenden experimentellen Zeitpunkten danach den Käfig mit E platzieren. Coli Lux-infizierte Neugeborenenmäuse und Damm in eine Biosicherheits-Level-2-laminare Flusshaube und die Software im Mikro-CT-Computer öffnen. Nach der Initialisierung des Systems und dem Warten auf die Stufentemperatur bei 37 Grad Celsius und die CCD-Temperatur bei minus 90 Grad Celsius werden bis zu vier betäubte Welpen in der Bauchlage auf die Bildgebende Box in der Bildgebungskammer gesetzt.

Schließen Sie die Tür zur Bildaufnahmekammer und wählen Sie die Lumineszenz-Bildoption. Wähle den Filter öffnen und den nächsten auswählen und den Anregungsfilter auf Block und den Emissionsfilter auf offen setzen. Wählen Sie 500, 520, 560, 580, 600 und 620 Nanometer aus.

Dann werden die Welpen abgebildet, bevor man sie mit der Mutter in den Käfig zurückbringt, mit Überwachung bis zur Narkosenaufwandlung.