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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:03 Min. • February 2nd, 2026
Beginnen Sie mit einer Agrobacterium tumefaciens-Kultur , die in einem Medium mit zwei Antibiotika gezüchtet wird, um Kontaminationen zu verhindern und die Plasmidretention sicherzustellen.
Die Bakterien enthalten einen Pflanzenexpressionsvektor, der ein interessantes Gen und ein Antibiotikaresistenzgen trägt.
Sie enthalten außerdem ein Helferplasmid mit einer Region von Virulenzgenen, die für die Übertragung des interessanten Gens in Pflanzenzellen erforderlich sind.
Übertragen Sie einen Teil in ein Rohr, das ein gepuffertes Medium enthält, das mit Acetosyringon, einem pflanzlich abgeleiteten Signalmolekül, und den Antibiotika ergänzt wird. Inkubieren Sie mit Zittern.
Acetosyringon diffundiert in die Zelle, löst einen Signalweg aus und aktiviert die Expression der Virulenzgene, die für die Übertragung des interessierten Gens erforderlich sind.
Die Kultur übertragen, zentrifugieren, um die Bakterien zu sammeln, und das Supernatant entsorgen.
Fügen Sie einen Salzpuffer hinzu und waschen Sie die Zellen wiederholt, um die hinzugefügten Antibiotika zu entfernen.
Die Bakterien im Puffer mit Acetosyringon wieder aufhängen und ohne Schütteln inkubieren, um die Virulenzgenexpression aufrechtzuerh
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