Isolierung und Kultivierung von Bakterien aus Zebrafisch-Embryonen zur Einschätzung der Infektionslast

Nehmen wir einen Zebrafisch-Embryo, der mit Mycobacterium abscessus infiziert ist, einem pathogenen Bakterium, das das zentrale Nervensystem angreift und Abszesse bildet, die Bakterien und Wirts-Immunzellen enthalten.

Inkubieren Sie den Embryo auf Eis, um ihn zu immobilisieren, und setzen Sie ihn dann einer Überdosis Anästhetikum aus, um die Herz- und Nervenaktivität zu stoppen, was zum Tod führt.

Waschen Sie den Embryo, um die Restbetäubung zu entfernen.

Fügen Sie eine Reinigungslösung hinzu, um die Zellmembranen zu stören und den Embryo zu lysieren.

Schneiden Sie das Lysat mit einer Nadel, um das Gewebe zu homogenisieren und die Bakterien freizusetzen.

Zentrifugieren, das Überlagermittel entsorgen und das Pellet in einer Tensidlösung wieder aufhängen, um eine bakterielle Klumpung zu verhindern.

Verdünnen Sie die bakterielle Suspension reihenweise und verteilen Sie sie auf Agarplatten.

Das Medium wird mit Antibiotika ergänzt, um das Wachstum anderer Mikroben zu hemmen, während die Mycobacterium-Zellen , die für Antibiotikaresistenz konstruiert wurden, sich vermehren.

Inkubieren, um die Koloniebildung zu fördern und so die Quantifizierung der Bakterienlast des Embryos zu ermöglichen.

Um kol