Untersuchung der autophagie-vermittelten Clearance von intrazellulären Bakterien in vitro

Nehmen Sie Schweine-Nierenzellkulturen, wobei eine Kultur mit einem Inhibitor vorbehandelt wurde, der den lysosomalen pH-Wert erhöht und so den autophagisch-lysosomalen Abbau beeinträchtigt.

Fügen Sie pathogene Bakterien und Zentrifugen hinzu, um den Kontakt zwischen Wirt und Erreger zu verbessern.

Inkubieren, um bakterielle Invasion und Internalisierung in endozytische Vesikel zu ermöglichen.

Die internalisierten Bakterien verbrauchen Wirtsnährstoffe, um sich zu vermehren, was den Stoffwechselstress auslöst.

Diese Spannung aktiviert die Autophagie, bei der sich eine autophage Membran um das Vesikel ausdehnt und ein Autophagosom bildet.

In den unbehandelten Zellen zielt das Autophagosom auf die Bakterien für den lysosomalen Abbau ab.

In den inhibitorbehandelten Zellen ist die autophagische Clearance beeinträchtigt, was zu höheren bakteriellen Belastungen führt.

Nach der Infektion werden die Zellen gewaschen und ein Antibiotikum angewendet, um die extrazellulären Bakterien zu beseitigen.

Fügen Sie ein Enzym hinzu, um die extrazelluläre Matrix zu verdauen und die Zellen zu lösen.

Mechanisch wird die Zellen gelysiert, um die intrazellulären Bakterien freizusetzen.

Plattieren Sie die Lysate, um das Bakterienwachstum zu ermöglichen.

Weniger Kolonien aus den unbehandelten Zellen bestätigen die Rolle des Autophagie-lysosomalen Abbauwegs bei der Beseitigung intrazellulärer Bakterien.