Detektion menschlicher Stuhlmetaboliten mittels eines bakteriellen Biosensors

Beginnen Sie mit einer bakteriellen Biosensorkultur, die in einem Medium suspendiert ist.

Diese manipulierten Bakterien produzieren einen Transkriptionsfaktor, der bei der Bindung an einen bestimmten Stuhlmetaboliten einen Promotor aktiviert, der mit einem fluoreszierenden Reporter-Gen assoziiert ist.

Zu dieser Kultur wird eine gefilterte menschliche Stuhlprobe hinzugefügt, die Metaboliten wie Laktat enthält, die an Wirts-Mikrobiom-Interaktionen beteiligt sind.

Verdünnen Sie diese Mischung mit einem frischen Medium, um ein optimales Reaktionsvolumen zu erhalten.

Inkubieren Sie ohne zu zittern, um die menschliche Darmumgebung nachzuahmen.

Die Stuhlmetaboliten diffundieren in die Bakterienzelle und binden an den Transkriptionsfaktor.

Dieser Komplex bindet an den Promotor und führt zur Genexpression des Reporters und zur Proteinproduktion.

Mische die Lösung für eine gleichmäßige Verteilung, verdünne sie in einem Puffer und analysiere sie mittels Durchflusszytometrie.

Während die bakteriellen Zellen einen Laser durchlaufen, bestätigt die von den Reporterproteinen emittierte Fluoreszenz das Vorhandensein des spezifischen fäkalen Metaboliten.