Wnt5A-vermittelte Verstärkung der bakteriellen Entfernung in murinen Makrophagen

Nehmen Sie eine adhärente Kultur von Maus-Makrophagen.

Behandle den Test gut mit einem Puffer, der Wnt5A, ein Signalmolekül, enthält, und die Kontrolle nur mit einem Puffer.

Mit einem bakteriellen Erreger infizieren und inkubieren.

In den Testzellen aktiviert Wnt5A eine Signalkaskade, die die Umstrukturierung des Zytoskeletts fördert und die bakterielle Aufnahme in Phagosomen fördert, während Kontrollzellen ohne dieses Signal weniger Bakterien internalisieren.

Waschen Sie, um nicht internalisierte Bakterien zu entfernen, und dann mit einem Medium mit Antibiotika inkubieren, um verbleibende extrazelluläre Bakterien zu eliminieren.

Die Wnt5A-Signalübertragung bereitet die bakterienhaltigen Phagosomen auf die Verschmelzung mit Lysosomen vor, was den bakteriellen Abbau ermöglicht.

Einige Bakterien entkommen durch das Platzen von Phagolysosomen.

In den Kontrollzellen führt die begrenzte Phagosomreifung zu einer erhöhten Entkomme.

Ernte die Zellen zu festgelegten Zeitpunkten. Fügen Sie destilliertes Wasser hinzu, um einen osmotischen Schock auszulösen, die Zellen zu lysieren und intrazelluläre Bakterien freizusetzen.

Verteile die Lysate auf Agarplatten und brüte sie aus.

Zählen Sie Kolonien, um den größeren zeitabhängigen bakteriellen Rückgang in mit Wnt5A behandelten Zellen zu bewerten.