JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 1:20 Min. • February 26th, 2026
Nehmen Sie Kulturen menschlicher Harnblasenepithelzellen in einer Multiwell-Platte.
Inkubieren Sie die Kontrollkultur mit Wildtyp-Enterobacter cloacae, einem pathogenen Bakterium mit pili, haarartigen Strukturen auf der bakteriellen Oberfläche.
Die FimH-Untereinheit des Pili bindet an den Wirtszellrezeptor und verankert die Wildtyp-Bakterien an die Wirtszelle.
Inkubieren Sie die experimentelle Kultur mit einer mutierten Enterobacter-Kloake, die kein FimH enthält.
Ohne FimH haften die mutierten Bakterien nicht an den Wirtszellen.
Nach der Inkubation mit einem Puffer waschen, um die ungebundenen Bakterien zu entfernen.
Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu und inkubieren Sie unter Bewegung, um die Wirtszellen zu stören und die anhaftenden Bakterien freizusetzen.
Die Lysate reihenweise verdünnen, auf Nährmedium anrichten und inkubieren.
Das Lysat aus der Kontrollkultur erzeugt Kolonien, während das Lysat aus der experimentellen Kultur dies nicht tut, was bestätigt, dass FimH für die bakterielle Adhäsion an die Wirtszellen unerlässlich ist.