JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:05 Min. • February 26th, 2026
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit Suspensionen eines nicht-pathogenen Bakteriums, das als Kontrolle dient, sowie verschiedene Stämme pathogener Bakterien, um deren relative Virulenz zu bewerten.
Die Bakterien sind in einem nährstoffarmen Medium suspendiert, um Überwucherung zu verhindern und eine Infektionsumgebung zu imitieren.
Fügen Sie jedem Brunnen L4-Stufen-C . elegans-Würmer hinzu und inkubieren Sie die Platte unter kontinuierlicher Bewegung, um den Kontakt zwischen Bakterien und Würmern zu verbessern.
Die Würmer ernähren sich von den Bakterien, die in ihren Darmtrakt eindringen und ihn besiedeln.
Die pathogenen Bakterien setzen Toxine frei, die das Darmgewebe schädigen, was zu systemischer Toxizität und letztlich zum Tod der Würmer führt.
Nach der Inkubation zählen Sie die lebenden Würmer in jedem Brunnen und erstellen Sie ein Diagramm zur Bewertung ihrer Überlebensraten.
Unterschiede in den Überlebensraten der Würmer spiegeln die relative Virulenz jedes Bakterienstamms wider.
Nach der Kultivierung der Aeromonas-Stämme und der Messung ihrer Absorptionsfähigkeit wie zuvor beschrieben wird die bakterielle Brühe bei 3.500 g für 15 Minuten zentrifugiert. Stellen Sie die bakterielle Brühe mit S Medium ein und geben Sie 195 Mikroliter Bakterienbrühe im S Medium in acht Brunnen einer 96-Well-Platte. Wasche die Würmer von der ENGL-Platte mit M9-Medium. Dann passen Sie die Konzentration der Wurmlösung auf fünf Würmer pro Mikroliter an.
Geben Sie 5 Mikroliter der Wurmlösung zu jedem der Brunnen der 96-Brunnen-Platte. Inkubieren Sie die Platte auf einem Shaker und zählen Sie die Anzahl der lebenden Würmer auf 24, 48 und 72 Stunden.