Muskelnekrose-Test bei C. elegans, induziert durch einen pathogenen Aeromonas-Stamm

Beginnen Sie mit einer nährstoffreichen Nematoden-Wachstumsplatte, die einen Rasen des pathogenen Bakteriums Aeromonas enthält.

L4-Stadium C. elegans-Würmer , die muskelspezifisches GFP exprimieren, auf den bakteriellen Rasen übertragen und inkubieren.

Die Würmer nehmen Bakterien zusammen mit Nährstoffen auf. Dadurch können die Bakterien den Darm erreichen und besiedeln.

Mit einem spezialisierten Sekretionssystem liefert Aeromonas Virulenzfaktoren in die Darmzellen des Wurms.

Diese Virulenzfaktoren diffundieren bis zur Körperwand, wo sie die Muskeln zerstören und strukturelle Schäden sowie Nekrose verursachen.

Bringen Sie die Würmer täglich auf einen frischen Teller mit einem bakteriellen Rasen, um eine kontinuierliche Pathogenexposition aufrechtzuerhalten.

Legen Sie die Würmer auf ein Agarosegel, das mit einem Betäubungsmittel ergänzt wird, um sie zu betäuben, und legen Sie dann einen Deckzettel an.

Mit einem GFP-Filter werden Fluoreszenzbilder in regelmäßigen Abständen aufgenommen.

Der fortschreitende Verlust des GFP-Signals deutet auf Muskelstörungen bei C. elegans hin, was eine durch Aeromonas induzierte Muskelnekrose während der Wirts-Pathogen-Interaktion darstellt.

Nach der Kultivierung der Aeromonas-Stämme und der Anpassung der Absorption gemäß dem Textprotokoll wird die bakterielle Brühe auf NGM-Platten entdeckt und verteilt.

Danach werden 50 L4-Würmer auf jede NGM-Platte übertragen. Alle 24 Stunden werden die Würmer auf frische NGM-Platten übertragen. Wählen Sie zufällig 10 Würmer aus und übertragen Sie sie auf ein 2%iges Agarose-Gel in M9-Medium auf einem Objektträger.

Schließlich positionieren Sie einen Deckzettel auf dem Gel und machen Sie Muskelaufnahmen mit einem grünen fluoreszierenden Proteinfilter auf einem mit einer Kamera ausgestatteten Leuchtstoffmikroskop.