JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:11 Min. • February 26th, 2026
Nehmen Sie zwei Schalen mit 3D-gedruckten Alginat-Matrizen, die jeweils entweder Kontroll- oder Testbakterienstämme kapseln.
Beide Stämme exprimieren konstitutiv ein fluoreszierendes Protein zur Visualisierung. Der Teststamm enthält außerdem ein induzierbares Gen, das proteinreiche extrazelluläre Fasern produziert, sogenannte Curli-Fasern.
Die Muster sind auf einem festen Medium gedruckt, das mit Kalzium und Rhamnose ergänzt wird.
Inkubieren, damit Calciumionen das Alginat vernetzen und so ein Hydrogel bilden.
Im Teststamm induziert Rhamnose die Produktion von Curli-Untereinheiten, die sich an der Zelloberfläche zu Fasern selbst zusammensetzen.
Verwenden Sie einen Fluoreszierenscanner, um die Muster zu fotografieren.
Behandeln Sie mit einer calcium-chelatierenden Lösung und inkubieren Sie durch Schütteln, um Calciumionen zu binden, was die Alginat-Querverbindungen stört und das Hydrogel auflöst.
Verwerfen Sie die Lösung und stellen Sie sich die Muster neu vor.
Die Behandlung führte dazu, dass das Kontrollmuster aufgelöst wurde, während das Testmuster aufgrund des stabilisierenden Netzwerks aus Curli-Fasern intakt blieb.
Inkubieren Sie die gedruckten Proben bei Raumtemperatur drei bis sechs Tage, um die Herstellung der Biofilmkomponenten wie Curli-Fasern zu ermöglichen.
Dann lege die Platte auf einen Leuchtstoffscanner und bilde die Platten ab.
Um die Alginatmatrix aufzulösen, geben Sie 20 Milliliter einer 0,5-molaren Natriumcitratlösung mit pH 7 auf das gedruckte Substrat und inkubieren Sie die Platte zwei Stunden lang bei Raumtemperatur beim Schütteln mit 30 U/min.
Anschließend entsorgt man die Flüssigkeit und bildet die Platten erneut, um sie mit den Bildern der Platten vor und nach der Citratbehandlung zu vergleichen.