Durchführung von Dünnschichtchromatographie zur Beurteilung des bakteriellen Exopolysaccharidabbaus

Beginnen Sie mit fermentierten Übernatoxinen, die abgebaute und undegradierte Exopolysaccharide oder EPS enthalten.

Diese EPS werden während der Fermentation gewonnen, wobei unterschiedliche Fäkalbakterienpopulationen in jedem Supernatant unterschiedlich auf EPS wirken.

Lokalisieren Sie die Supernatanten nahe der Basis einer dünnschichtigen Chromatographieplatte, die mit einer polaren stationären Phase vorbeschichtet ist.

Trocknen Sie die Platte an der Luft und legen Sie sie dann in eine Kammer mit einer mobilen Phase und niedrigerer Polarität als die stationäre Phase.

Wenn die mobile Phase steigt, wandern EPS je nach Polarität und Größe.

Große, undegradierte EPS interagieren stark mit der stationären Phase und bleiben nahe am Ursprungsort.

Kleinere degradierte Fragmente binden schwach und wandern mit der mobilen Phase nach oben.

Nimm den Teller heraus und lasse ihn an der Luft trocknen.

Tauchen Sie die Platte in ein kohlenhydratfärbendes Reagenz, das mit EPS reagiert.

Trockne die Platte an der Luft, erhitze sie dann, um das EPS zu dehydrieren und farbige Bänder zu bilden.

Ein einzelnes Band in der Nähe des Ursprungs bestätigt undegradiertes EPS, während mehrere Bänder die EPS-Degradation du