JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:51 Min. • March 31st, 2026
Nehmen Sie einen antibiotikaresistenten Stamm von G. vaginalis auf, einem anaeroben Bakterium, das mit Harnwegsinfektionen bei Mäusen assoziiert wird.
Während einer ersten Blaseninfektion bildet uropathogene E. coli Ruhereservoirs in den Blasenepithelzellen.
Die anschließende Exposition gegenüber G. vaginalis löst durch Toxine eine Abscheidung oberflächlicher Zellen aus, wodurch ruhende UPEC wieder auftauchen und wiederkehrende Harnwegsinfektionen verursachen können.
Zur Herstellung des G. vaginalis inoculum streicht man den Bestand ohne Antibiotika auf eine Nähragarplatte, um die bakterielle Erholung zu ermöglichen.
Anaerob inkubieren, um aktiv wachsende Kolonien zu erhalten.
Übertragen Sie eine Runde dichter Kolonien in antibiotikafreie Nährbrühe.
Statisch unter anaeroben Bedingungen inkubieren, bis die gewünschte Bakterienkonzentration erreicht ist.
Messen Sie die optische Dichte, um die Konzentration zu schätzen.
Übertragen Sie die Suspension in ein Rohr, zentrifugieren Sie die Bakterien, um die Bakterien zu pelletieren, entsorgen Sie den Supernatant und suspendieren Sie sie erneut in einem Puffer.
Stellen Sie serielle Verdünnungen vor und beschichten Sie sie auf antibiotikahaltigen Medien, um selektives Wachstum von G. vaginalis zu ermöglichen und eine Kontamination zu verhindern. Zähle die Kolonien, um die Impfstoffkonzentration zu bestimmen.
Beginne damit, das G zu drehen. Vaginalis-Dehnung von einem Gefrierlager bei minus 80 Grad Celsius in eine anaerobe Kammer. Striche die Bakterien ohne Antibiotika auf eine NYCIII-Platte. Inkubieren Sie die Platte anaerob bei 37 Grad Celsius für 24 Stunden.
In der anaeroben Kammer inokulieren Sie fünf Milliliter anaerobes NYCIII-Medium mit einer ein Mikroliter großen Schleife voller Zellen aus der NYCIII-Platte und inkubieren Sie die Kultur statisch bei 37 Celsius unter anaeroben Bedingungen für 18 Stunden. Verwenden Sie keine Antibiotika in das Wachstumsmedium. Bestimmen Sie den OD600 der Kultur mit einem Spektrophotometer.
Dann wird es eine Minute lang bei 9.600 x g zentrifugiert und das Medium aspiriert. Das bakterielle Pellet in PBS auf die gewünschte Konzentration resuspendieren und das Inokulum serienweise verdünnen und plattieren.