Why does null hypothesis testing matter for colonoid barrier validation?

Null hypothesis testing enables objective assessment of whether observed barrier function changes are statistically significant, supporting robust target validation and reducing false positives in early discovery.

How does independent variable isolation fit in colonoid monolayer studies?

Isolating variables such as differentiation inhibitors or pathogen exposure allows precise attribution of effects on epithelial barrier integrity, strengthening mechanistic insights and discovery pipeline confidence.

What do quantitative tight junction measurements enable in screening?

Quantitative assessment of tight junction formation provides actionable data for comparing compound effects, enabling reliable screening and prioritization of candidates that modulate barrier properties.

Why are replication requirements critical for cross-functional colonoid workflows?

Replication ensures reproducibility and comparability of barrier function data across teams, facilitating collaborative decision-making and reducing risk of irreproducible findings in portfolio advancement.

What statistical analysis is required before implementing barrier function assays?

Statistical analysis of barrier integrity outputs, such as tight junction quantification, is essential to validate assay performance and support data-driven go/no-go decisions in R&D workflows.

Erzeugung einer menschlichen Colonoid-Monoschicht mit Barrierfunktion zur Untersuchung von Wirt-Pathogen-Interaktionen

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:04 min • February 26th, 2026

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Beginnen Sie mit einer Multiwell-Platte, die ein kollagenbeschichtetes Bohrloch-Insert enthält.

Füge dem Brunnen ein Ausdehnungsmedium hinzu.

Die Nährstoffe im Medium fördern die Zellproliferation, während die Differenzierungsinhibitoren einen stammartigen Zustand aufrechterhalten.

Fügen Sie eine Suspension von Epithelzellclustern, die aus Darmstammzellkulturen gewonnen wurden, zum Bohrloch-Einsatz hinzu und inkubieren.

Die Zellen haften an der kollagenbeschichteten Oberfläche und erhalten Nährstoffe sowohl aus dem oberen als auch aus dem unteren Kompartiment.

Die Inhibitoren verhindern die Zelldifferenzierung und fördern die Vermehrung der Zellcluster.

Mit einem Phasenkontrastmikroskop beobachten Sie die Kultur.

Sobald die Monoschicht gebildet ist, wird das Kulturmedium durch ein frisches Medium ohne zellinterne Differenzierungshemmer ersetzt.

Dies erleichtert die Differenzierung der Zellen zu reifen Kolonepithelzellen mit engen Übergängen.

Diese Zellen sezernieren Schleim und entwickeln eine funktionelle Monoschicht, die die physiologische Darmbarriere für Wirts-Pathogen-Interaktionsstudien nachahmt.

Pipettieren Sie 600 Mikroliter Expansionsmedium in den Raum unter jedem Einsatz. Pipettieren Sie 100 Mikroliter Zellsuspension aus dem Fläschchen in jede Einlage.

Bringen Sie die Platte zurück in den Gewebekultur-Inkubator und lassen Sie sie mindestens 12 Stunden ungestört. Vermeiden Sie das Schütteln oder scharfe Kippen der Platte. Nach dem Inkubieren wird die Platte auf ein Phasenkontrast-Lichtmikroskop mit einem 2,5- bis 10-fachen Objektivobjektiv gesetzt.

Erfrischen Sie mit Kulturmedium ohne Inhibitoren, um die Hemmungsbehandlung abzubrechen. Erfrischen Sie das Medium weiterhin alle zwei bis drei Tage, bis es zusammenfließt.