Etablierung eines Mausmodells der vaginalen Streptokokkeninfektion der Gruppe B

Nehmen Sie eine Kultur der Gruppe-B Streptokokken (GBS), einem opportunistischen bakteriellen Erreger.

Die Kultur in frischem Medium verdünnen und inkubieren, um aktiv teilende Bakterien zu erhalten.

Übertragen Sie die Kultur in ein konisches Rohr.

Zentrifugiere sie, um die Bakterien zu pelletieren, und entsorge dann das Überlagerungsmittel.

Waschen Sie die Bakterien mit einem Puffer.

Zentrifugiere erneut, entferne das Supernatant und suspendiere die Bakterien erneut im Puffer.

Als Nächstes verwenden Sie eine hormonbehandelte weibliche Maus mit einem primierten vaginalen Epithel, das anfälliger für Infektionen ist.

Fessel die Maus. Mit einer feinen Pipettenspitze dosieren Sie die GBS-Suspension in das vaginale Lumen.

Lass die Maus los, hebe ihren Schwanz und lass die Vorderpfoten auf einer festen Fläche laufen.

Dies fördert die Inkulumretention im vaginalen Lumen und ermöglicht so die GBS-Adhärenz.

Untersuchen Sie die Vaginalöffnung auf den Rückfluss des Inokulums.

Die anhaftenden Bakterien besiedeln die vaginale Epitheloberfläche und entwickeln eine Infektion.

Das Mausmodell mit vaginaler Infektion ist bereit für weitere Studien.

Am selben Tag wie die Injektion sollte man eine über Nacht fünf-Milliliter-Flüssigkultur des GBS-Stamms aus Todd-Hewitt-Brühe (THB) bei 37 Grad Celsius anbauen.

Am nächsten Morgen sollte man das GBS mit einem Volumen von 1 bis 10 in frischem THB subkultivieren, um zwei bis drei Stunden bei 37 Grad Celsius zu inkubieren, bis die Bakterien die mittlere Logaritam-Phase erreichen. Anschließend wird die Subkultur in ein steriles, 15-Milliliter-konisches Rohr übertragen und die Bakterienzellen zentrifugiert. Die Pellet in 200 Mikrolitern sterilem PBS wieder suspendieren.

Dann wird das Gesamtvolumen der Suspension auf 1 Milliliter PBS pro 10 Mäuse erhöht, um in einem neuen 5-Milliliter-Kulturrohr einen OD₆₀₀ von 0,4 zu erreichen. Übertragen Sie die Kultur in ein neues 15-Milliliter-Rohr und pelletieren Sie die Bakterien erneut. Dann werden die Zellen in PBS bei einem Zehntel des ursprünglichen Volumens wieder suspendiert.

Reservieren Sie 50 Mikroliter der Bakterien für die serielle Verdünnung und Beschichtung auf THB-Agar, um die genaue CFU des Inokulums zu bestimmen. Dann werden 10 Mikroliter GBS in eine 200-Mikroliter-Gel-Pipettenspitze gezogen und die lose Haut am Nacken, des ersten Tieres, manuell zwischen Daumen und Zeigefinger gesichert, gefolgt von der Bewegungsunfähigkeit des Schwanzes. Führen Sie die Pipettenspitze 5 bis 10 Millimeter in das vaginale Lumen ein und geben Sie das gesamte Volumen des Inokulums ab.

Dann lassen Sie sofort den Nacken los und heben Sie den Schwanz, um das Hinterteil des Tieres anzuheben, während Sie mit den Vorderpfoten auf einer harten Oberfläche gehen. Nach einer Minute inspizieren Sie die Vaginalöffnung visuell auf einen Rückfluss des Inokulums.