Quantifizierung der Streptokokkenlast der Gruppe B im vaginalen Lumen der Maus mittels Abstrich und chromogener Kultur

Nehmen wir eine weibliche Maus, die vaginal mit Gruppe-B-Streptokokken oder GBS kolonisiert wurde, einem opportunistischen bakteriellen Erreger des Vaginaltrakts.

Halten Sie die Maus fest und führen Sie einen mit Puffer befeuchteten Tupfer in das vaginale Lumen ein.

Drehen Sie den Abstrich vorsichtig, während Sie leichten Druck auf die Scheidenwand ausüben, um oberflächengebundene Bakterien zu lösen.

Tauchen Sie den Abstrich in einen Puffer ein und bewegen Sie, um die Bakterien zu suspendieren.

Die Suspension im Puffer wird seriell verdünnt und auf einen chromogenen Differentialagar gelegt, der ein Substrat enthält, das mit einem Chromogen verbunden ist.

Inkubieren, um das Bakterienwachstum zu ermöglichen.

Während der Inkubation exprimiert GBS ein spezifisches Enzym, das das chromogene Substrat hydrolysiert.

Das freigesetzte Chromogen wird spontan oxidiert und dimerisiert und bildet eine rosa oder mauvefarbene Verbindung.

Dies führt zu rosa oder mauve GBS-Kolonien, die sich optisch von anderen Bakterienkolonien unterscheiden.

Zähle die Kolonien, um die GBS-Last zu quantifizieren und ihre Persistenz im Mausmodell zu bewerten.

Kurz vor dem Abstrich wird die Baumwolle in PBS vorbefeuchtet und eine der Mäuse wie gerade demonstriert festgehalten.

Führen Sie den Abstrich 10 Millimeter in das vaginale Lumen ein und drehen Sie es vorsichtig viermal im Uhrzeigersinn und viermal gegen den Uhrzeigersinn, während Sie leichten Druck auf die Scheidenwand ausüben.

Setzen Sie den Abstrich in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr mit 100 Mikrolitern PBS und lassen Sie das Rohr etwa 15 Sekunden vortexen, um die Bakterien aus den Baumwollfasern freizusetzen. Anschließend wird jede Probe seriell in PBS verdünnt und 20 Mikroliter von 1 bis 10 bis 10.000 Verdünnungen auf einer differentiellen Agar-Medium-Platte nach Herstelleranweisung für die Inkubation bei 37 Grad Celsius für 24 Stunden verblasst. GBS-Kolonien erscheinen entweder leuchtend pink oder mauvefarben.