RNA-Extraktion aus Listeria monocytogenes , die aus infizierten Maus-Makrophagen gewonnen wurden

Nehmen Sie eine Tube mit Filterpapier, das Listeria monocytogenes enthält. Diese Bakterien werden aus infizierten Maus-Makrophagen gewonnen.

Fügen Sie einen Puffer mit RNase-Inhibitoren hinzu, um den RNA-Abbau zu verhindern, und lassen Sie den Röhrchen dann in mehreren Winkeln vortexen, um die Bakterien zu lösen.

Zentrifugieren und die Suspension in ein Rohr mit einer Phenol-Chlorform-Reinigungsmischung übertragen.

Vortexen und inkubieren bei erhöhter Temperatur, um bakterielle Membranen zu zerstören, Proteine zu inaktivieren und die Bakterien zu lysieren, wodurch intrazelluläre Komponenten freigesetzt werden.

Zentrifuge, um die RNA-reiche wässrige Phase von den anderen Komponenten zu trennen.

Sammeln Sie die RNA und übertragen Sie sie in ein Rohr mit Natriumacetat und Ethanol.

Vortex und dann bei niedriger Temperatur inkubieren.

Natriumacetat neutralisiert die negative Ladung der RNA, während Ethanol und kalte Bedingungen die RNA-Ausfällung fördern.

Zentrifuge, um die RNA zu pelletieren.

Entferne das Supernatant und wasche das Pellet mit kaltem Ethanol.

Zentrifugieren Sie erneut, entfernen Sie das Supernatant, trocknen Sie an der Luft und fügen Sie RNase-freies Wasser hinzu.

Speichere die RN