JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:18 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer Kulturplatte, die isolierte Kolonien eines Bodenbakteriums enthält.
Picke und impfe eine Kolonie in eine bedeckte Kulturflasche mit einem Nährstoffmedium.
Brüte die Kultur mit Zittern aus.
Die belüftete Flasche hat innere Rillen, die die Turbulenz beim Schütteln erhöhen und die Belüftung verbessern.
Dieser Prozess gewährleistet eine gleichmäßige Sauerstoffverteilung und verhindert Zellverklumpungen und Sedimentationen, wodurch eine gleichmäßige Nährstoffverteilung möglich ist.
Die Bakterien vermehren sich schnell und bilden eine dichte Suspension mit Zellen, die einheitliche physiologische Eigenschaften aufweisen.
Nehmen Sie in regelmäßigen Abständen eine Probe in einer Cuvette.
Mit einem Spektrophotometer wird Licht durch die Probe geleitet. Die Menge des durchgelassenen Lichts wird gemessen, um das bakterielle Wachstum zu quantifizieren, bekannt als optische Dichte oder OD.
Wählen Sie Bakterienkulturen in der exponentiellen bis frühen stationären Phase aus, da die Zellen in diesem Stadium sehr metabolisch aktiv sind und daher am anfälligsten für eine wirksame Bakteriophageinfektion.
Arthrobacter-Zellen werden aus Kolonien kultiviert, die auf einer LB-Agarplatte gestreift und bei 30 Grad Celsius zwei bis drei Tage inkubiert werden.
Benutze eine sterile Schleife, um eine Kolonie auszuwählen und sie zu 50 Millilitern LB-Brühe in einer bedeckten Kulturflasche hinzuzufügen. Inkubieren Sie die Flasche in einem schüttelnden Inkubator bei 225 U/min bei 30 Grad Celsius für etwa 24 Stunden, um exponentielle oder frühe stationäre Phasenzellen für Phageninfektionsexperimente zu erhalten.
Überwachen Sie den Zustand des bakteriellen Wachstums genau, um zu verhindern, dass die Zellen in den mittleren bis späten stationären Wachstumszustand gelangen. Der ideale OD600 für die Phagenisolierung liegt zwischen 0,5 und 0,7.