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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:06 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer immobilisierten, dissektionierten Mausblase, die mit β-galaktosidase-exprimierendem uropathogenem E. coli vorinfiziert ist und in eine silikonbeschichtete Mehrwellenplatte gelegt wird.
Das Lumen der Blase zeigt nach oben und legt die Epithelzellen frei, die intrazelluläre Bakteriengemeinschaften, sogenannte IBCs, enthalten.
Waschen Sie die Blase mit einem Puffer, um Rückstände und unbefestigte Bakterien zu entfernen.
Als Nächstes fügen Sie ein Fixationsmittel hinzu und inkubieren Sie, um zelluläre und bakterielle Strukturen zu erhalten.
Entferne das Fixativ und wasche mit einem Puffer.
Waschen Sie anschließend mit einem waschmittelhaltigen Puffer, um die zellulären und bakteriellen Membranen zu permeabilisieren.
Entfernen Sie den Puffer, geben Sie dann eine Lösung von X-gal, einem Substrat aus β-Galactosidase, mit Redoxreagenzien ergänzt, und inkubieren.
X-Gal- und Redoxreagenzien gelangen in die Bakterien. β-Galactosidase spaltet X-gal und bildet ein farblos Zwischenprodukt, das durch Redoxreagenzien oxidiert wird, um einen blauen Niederschlag zu bilden.
Unter einem Seziermikroskop bestätigen die blauen Punkte in der Blase die IBCs und deuten auf eine Harnwegsinfekt
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