JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:52 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer betäubten Maus, deren Rücken freigelegt ist und auf einen Petrischalendeckel gelegt wird.
Die Maus hat eine Brandwunde, die mit biolumineszenten, medikamentenresistenten Bakterien infiziert ist.
Decken Sie die Augen der Maus mit Alufolie ab, um eine Überexposition gegenüber blauem Licht zu vermeiden.
Platziere die Maus unter ein blaues LED-Gerät in festem Abstand.
Bestrahlen Sie die Wunde mit konstanter Intensität. Erhöhen Sie die Expositionszeit, um höhere Dosen zu verabreichen.
Das Licht dringt in das Wundgewebe ein und erreicht die kolonisierenden Bakterien.
In diesen Bakterien absorbieren lichtempfindliche Moleküle das blaue Licht und werden photoaktiviert, wodurch reaktive Sauerstoffspezies (ROS) entstehen.
ROS schädigen bakterielle Bestandteile, einschließlich biolumineszente Proteine, was zum Zelltod der Bakterien mit minimalen Schäden am umliegenden Gewebe führt.
Nach jeder Exposition wird eine Biolumineszenzbildgebung durchgeführt, um die Lebensfähigkeit der Bakterien rund um die Wunde zu überwachen.
Mit zunehmender Dosis nimmt das Signal entsprechend ab.
Dieser Rückgang deutet auf die antibakterielle Wirkung des durch blaues Licht induzierten oxidativen Stresses hin.
Nach der Betäubung der Mäuse werden die Tiere gemäß dem Textprotokoll zufällig in eine antimikrobielle Blaulicht- oder aBL-behandelte Gruppe und eine unbehandelte Kontrollgruppe eingeteilt. Für die mit aBL behandelte Gruppe verwenden Sie Alufolie, um die Augen der Mäuse zu bedecken und eine Überlichtbelastung zu vermeiden. Platziere die Mausverbrennungen direkt unter die LED mit einem Deckel einer 35-Millimeter-Petrischale unter dem Bauch, um den Rücken in horizontaler Position zu halten.
Ersetze als Nächstes das Energiemessgerät durch eine Maus auf einer quadratischen Petrischale. Dann stellen Sie die Maushöhe wieder so ein, dass der Abstand zwischen der LED-Öffnung und der Oberfläche des Mausverbrennens gleich dem Abstand zwischen der LED-Öffnung und dem Lichtsensor des Energiemessers ist. Bestrahlen Sie die infizierten Verbrennungen mit einer Bestrahlung von 100 Milliwatt pro Quadratzentimeter.
Abgabe von aBL in Aliquoten von 72 Joule pro Quadratzentimeter, bis die Gesamtdosis von 360 Joule pro Quadratzentimeter erreicht ist. Nach jeder Lichtdosis wird eine Biolumineszenzbildgebung der Mausverbrennungen durchgeführt, wie zuvor in diesem Video gezeigt. Für die unbehandelte Kontrollgruppe führen Sie Biolumineszenzbildgebung der Mausverbrennungen in denselben Zeitintervallen durch wie bei der aBL-behandelten Gruppe.