JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:47 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einem perforierten Objektträger und legen Sie eine kreisförmige Gewebebiopsie über dem perforierten Bereich.
Als Nächstes setzen Sie eine Gummidichtung darüber.
Drehen Sie diese Baugruppe um und setzen Sie sie in den unteren Teil des Metallrahmens der Perfusionskammer ein.
Richten Sie den oberen Rahmen mit dem unteren aus und sichern Sie sie.
Verwenden Sie einen Bremssattel, um die gleichmäßige Kammergröße zu überprüfen.
Die Kammer ist mit einer Pumpe verbunden, die wiederum an ein Reservoir angeschlossen ist, das Bakterien enthält, die in einem Puffer aufgehängt sind.
Beginnen Sie mit der Durchströmung der bakteriellen Suspension in die Kammer.
Die zentrale Perforation im Schlitten ermöglicht das Eindringen der bakteriellen Suspension in die Baugruppe.
Dies ermöglicht die Interaktion zwischen Bakterien und der Gewebeoberfläche und fördert Haftung und Besiedlung.
Dieses Setup erzeugt ein in-vitro-Modell , das die in vivo bakterielle Besiedlung des Gewebes nachahmt.
Um das Protokoll zu beginnen, werden eine zuvor vorbereitete Gewebebiopsie mit 10 Millimeter Durchmesser und gleicher Dicke zwischen einem Objektträger und einer acht Millimeter großen Rundperforation sowie einer Gummidichtung mit der Innenseite nach oben gelegt, um Kontakt mit der bakteriellen Suspension zu machen.
Konzentrieren Sie sich auf die Orientierung des Gewebetransplantats während der Lagerung im Halter. Stellen Sie sicher, dass die innere Oberfläche des Gewebes bereits dem Blutkreislauf ausgesetzt ist, mit dem Vordergesicht nach oben, um Ihr experimentelles Medium zu berühren.
Führen Sie anschließend Ihren Halter mit dem Gewebe in das Dichtungsblatt, das im unteren Metallrahmen der Kammer eingebettet ist.
Befestigen Sie den oberen Metallrahmen mit der entsprechenden Dichtungsplatte am Boden der Kammer mit dem zuvor eingesetzten Gewebehalter. Dann montiere die gesamte Kammer mit acht Schrauben und Schraubmuttern. Stellen Sie sicher, dass die Kammerhochkeit bei allen Transplantaten immer gleich ist, indem Sie einen Bremssättel oder Lineal verwenden.
Als Nächstes verbinden Sie die Durchflusskammer mit einer peristaltischen Pumpe. Dann verbinden Sie den 400-Milliliter-Flüssigkeitsbehälter mit den Schläuchen. Durchfließen Sie das Gewebe mit 100-Milliliter-Suspensionen von zehn auf die sieben fluoreszenzmarkierten Koloniebildende Einheiten in phosphatgepufferter Kochsalzlösung mit einer schieren Belastung von drei Dines pro Quadratzentimeter und einer entsprechenden Durchflussrate von vier Millilitern pro Minute für eine Stunde unter Verwendung der peristaltischen Pumpe und des bakteriellen Reservoirs. Zirkulieren Sie kontinuierlich die 100-Milliliter-Bakteriensuspension mit demselben Sammelbehälter.