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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:30 Min. • February 26th, 2026
Nimm Behälter mit Tomatensämlingen, die in sterilem Sand wachsen.
Die Wurzeln des Setzlings sind entweder mit einem celluloseproduzierenden Wildtyp oder einem zellulosearmen mutierten Stamm eines pflanzenpathogenen Bakteriums impft.
Entfernen Sie das Dichtungsmaterial aus einem Behälter, wenden Sie es auf steriles Papier um und tippen Sie an, um den Sandzylinder mit der Pflanze freizugeben.
Spalten Sie den Sandzylinder längs, um die Wurzel freizulegen.
Tauchen Sie dann die Wurzel in einen sterilen Puffer und schütteln Sie, um lose angeheftete Bakterien zu lösen.
Wiederhole den Vorgang für die andere Wurzel.
Umleiten Sie die gewaschenen Wurzeln in einen frischen Puffer. Sonikieren Sie sie, um fest haftende Bakterien freizusetzen.
Verwenden Sie diese sonicierten Suspensionen, um serielle Verdünnungen herzustellen, sie auf Agar zu verplatten und zu inkubieren, damit lebensfähige Bakterien Kolonien bilden können.
Höhere Lebensfähigkeitszahlen im Wildtyp-Stamm im Vergleich zum cellulosearmen Mutanten unterstreichen die entscheidende Rolle von Zellulosefibrillen bei der Förderung bakterieller Adhäsion an der Wurzeloberfläche.
Um die Anzahl der lebensfähigen Bakterien zu bestimmen, die in Sand gezüchtet werden, beginnen Sie damit, das Dichtungsmaterial von oben und unten im Behälter zu entfernen.
Stellen Sie den Behälter auf ein Stück steriles Papier und stoßen Sie den Behälter vorsichtig gegen die Oberfläche, um den Sand zu lösen, bevor Sie den Sand mit der Pflanze vorsichtig aus dem Behälter heben.
Wenn der Sandzylinder und die Pflanze frei auf dem Papier sind, spalten Sie den Sand in der Mitte auf, um die Pflanzenwurzel freizulegen. Wenn gewünscht, entnehmen Sie Sandproben sowohl nahe dem Rand des Behälters als auch nahe der Wurzel. Dies kann nützlich sein, um die Ausbreitung, Ansammlung und das Wachstum von Bakterien zu bestimmen.
Nehmen Sie die Wurzel auf und entfernen Sie den Sand und die Bakterien, die locker haften, indem Sie die Wurzel in ein gemessenes Volumen Wasser oder einen Puffer tauchen und vorsichtig schütteln. Bestimmen Sie die lebensfähige Zellanzahl der Bakterien in der resultierenden Suspension, indem Sie sie auf geeignetes Medium wie Luria agar plattieren. Dies stellt die Anzahl der Bakterien dar, die lose mit der Wurzel verbunden sind. Schließlich werden die fest gebundenen Bakterien durch Sonikation entfernt und ihre Anzahl bestimmt.