JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:25 Min. • March 31st, 2026
Platzieren Sie die Polymerase-Kettenreaktion oder PCR-Tuben mit PCR-tauglichen Tabletten, die speziell auf die jeweiligen lebensmittelbedingten Krankheitserreger spezialisiert sind, auf ein gekühltes PCR-Röhrchengestell.
Jede Tablette enthält zielspezifische Primer, DNA-Polymerase, dNTPs und einen fluoreszierenden Farbstoff, der in der PCR-Reaktion verwendet wird.
Fügen Sie angereichertes Fliegenlysat hinzu, das eine hohe Menge DNA von pathogenen Bakterien enthält, um die Reaktionsmischung zu bilden.
Versiegeln Sie die Röhren mit optischen Kappen, um Verdunstung zu verhindern.
Laden Sie die PCR-Röhren in den Thermozyklus und führen Sie separate PCR-Durchläufe mit pathogenspezifischen Programmen für jeden Zielpathogen durch.
Während der PCR denaturiert die DNA, Primer binden an die Zielsequenz, und die Amplifikation erzeugt doppelsträngige DNA, die den Farbstoff bindet und Fluoreszenz ausstrahlt.
Wiederholte Zyklen führen zu exponentieller DNA-Amplifikation und erhöhter Fluoreszenz.
Das Instrument verfolgt die Fluoreszenz in Echtzeit, um das Vorhandensein der zielbedingten lebensmittelbedingten Krankheitserreger in der Probe nachzuweisen.
Um mit der PCR-basierten Erkennung zu beginnen, kühlen Sie zunächst ein PCR-Röhrenrack auf einem Kühlblock. Anschließend werden die entsprechenden PCR-Tuben mit PCR-reifen Tabletten für den Ziel-Lebensmittelerreger in den Halter gelegt.
Entferne vorsichtig die Kappen von den PCR-Röhrchen mit dem Entdeckungswerkzeug und entsorge sie. Überprüfen Sie, ob jede Tube eine Tablette enthält. Anschließend werden 50 Mikroliter Lysat in die entsprechenden PCR-Tuben übertragen.
Befestigen Sie neue optische Kondensatoren mit dem Verschlusswerkzeug an den PCR-Röhren. Nach der Montage der Reaktionen werden die PCR-Röhren in das PCR-Zyklus-Detektionssystem geladen. Dann wird das Programm ausgeführt und die Ergebnisse wie im Protokoll des Herstellers beschrieben angesehen.
Dieses Protokoll demonstriert die Verwendung der PCR zur Detektion lebensmittelbedingter Krankheitserreger aus angereicherten Fliegenproben. Es ist von Bedeutung für die Verbesserung der Lebensmittelsicherheit, da es eine schnelle Identifizierung von Krankheitserregern ermöglicht.
Diese PCR-basierte Methode ermöglicht einen schnellen und empfindlichen Nachweis von lebensmittelbedingten Krankheitserregern aus angereicherten Fliegenproben und unterstützt die Risikobewertung in frühen Stadien von Lebensmittelsicherheitsabläufen. Durch die Bereitstellung von Echtzeit-Fluoreszenzsignalen und pathogen-spezifischer Amplifikation erhöht sie die Vorhersagesicherheit bei der Identifizierung von Kontaminationsquellen. Der Ansatz unterstützt eine mechanistische Risikominimierung, indem er die Umweltüberwachung mit dem Vorhandensein von Pathogenen verknüpft und Entscheidungen über Fortsetzung oder Abbruch in präklinischen und translationsorientierten Forschungsarbeiten zur Lebensmittelsicherheit unterstützt.
Die Methode eignet sich für die frühe Entdeckungsphase bis hin zur Identifizierung von Leitverbindungen, in der der Nachweis von Umweltpathogenen die Zielvalidierung und die Bereitschaft von Assays für nachgeschaltete Screening-Kampagnen unterstützt.
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Zuletzt aktualisiert: 22 August 2026