JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:03 Min. • February 26th, 2026
Beginnen Sie mit einer Mausmilz, die bereits mit pathogenen Bakterien infiziert ist.
Geben Sie die Milz in kalte, phosphatgepufferte Kochsalzlösung, um die bakterielle Lebensfähigkeit zu erhalten.
Mit einem Homogenisator homogenisieren Sie die Milz, um sie mechanisch zu zerstören und die intrazellulären Bakterien in den Puffer freizusetzen.
Dadurch entsteht eine bakterielle Suspension, die die gesamte bakterielle Belastung in der Milz widerspiegelt.
Führen Sie serielle Verdünnungen des Homogenats durch, um die Bakteriendichte in der Lösung zu reduzieren und eine genaue Bakterienzählung zu bestimmen.
Als Nächstes nehmen Sie eine Nähragarplatte, die in zwei Abschnitte unterteilt ist.
Schichten Sie dieselbe bakterielle Verdünnung auf jeden Abschnitt der Agarplatte, um Replikationen zu erzeugen.
Lass den Teller trocknen, drehe ihn dann um und brüte ihn aus. Während der Brutzeit vermehren sich lebensfähige Bakterien und bilden eigenständige Kolonien.
Zählen Sie die Kolonien aus jedem Abschnitt der Platte, um die durchschnittlichen koloniebildenden Einheiten (CFUs) zu berechnen, die die gesamte bakterielle Belastung in der Milz während der Infektion darstellen.
Die Milz befindet sich in einem 15-Milliliter-Rohr mit zwei Millilitern PBS. Als Nächstes verwenden Sie einzelne, einwegige Homogenisierer pro Probe, um das Gewebe auf Eis zu macerieren, gefolgt von einer seriellen Verdünnung der Gewebeschlamm.
Decken Sie die Verdünnungen doppelt auf verschiedenen Seiten einer einzelnen TSA-Platte und lassen Sie die Proben kurz trocknen. Dann werden die Platten umgekehrt und die Proben über Nacht in einem statischen Inkubator bei 37 Grad Celsius kultiviert, wobei die Bakterienkolonien von beiden Seiten der Platte und aus jeder Verdünnung am nächsten Morgen gemittelt werden.