JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 1:45 Min. • February 26th, 2026
Nehmen Sie Gewebekryosektionen aus dem Kekum, einem Bereich des Dickdarms. Ein Abschnitt stammt von einer Maus, die nur mit Clostridioides difficile infiziert ist. Der andere Abschnitt stammt von einer Maus, die mit C. difficile und Enterococcus faecalis mitinfiziert wurde.
Im mitinfizierten Gewebe metabolisiert E. faecalis Wirtsarginin und setzt Ornithin frei. C. difficile nimmt dieses Ornithin auf, was die wachstumsbedingte Toxinproduktion und Gewebeschäden fördert.
Um diese Proben mittels MALDI-Bildgebung zu analysieren, wird eine einheitliche Matrixlösungsschicht aufgetragen.
Laden Sie die Objektträger in ein MALDI-Massenspektrometer, wo ein Laser das Gewebe scannt und die Aminosäuren durch die Matrix ionisiert.
Laden Sie die Objektträger in ein MALDI-Massenspektrometer, wo ein Laser das Gewebe scannt und die Aminosäuren durch die Matrix ionisiert.
Die resultierenden Ionen werden durch ihr Masse-Ladungs-Verhältnis getrennt und vom Instrument detektiert, um räumliche Karten der Aminosäureverteilung zu erstellen.
Das mitinfizierte Gewebe zeigt niedrigere Arginin- und höhere Ornithinwerte als die monoinfizierte Probe, was die mikrobielle Kooperation angetriebene C. difficile-Pathogenese unterstützt.
Durchführung der Anwendung der MALDI-Matrix und der MALDI-Bildgebungsmassespektrometrie, wie zuvor gezeigt.
Analysieren Sie die Ionenbilder aus mehreren biologischen Replikaten und vergleichen Sie die Ergebnisse auf eine Signifikanz mittels Intensitätsbox-Diagrammvergleiche mit der SCiLS-Statistiksoftware.