Konfokale Bildgebung bakterieller Biofilme, indusert durch Sputumfiltrate von Mukoviszidose-Patienten

Inkubieren Sie ein Kammerdeckglas mit haftenden Bakterien in einem Medium, das mit Mukoviszidose-Sputumfiltrat abgeleitet und ausschließlich im Medium ergänzt wird.

Das Sputumfiltrat enthält wirtsabgeleitete Komponenten, die bakterielle Signalwege stimulieren und so die Matrixproduktion und die Bildung von Biofilmen auslösen.

Sobald die Biofilme gebildet sind, entsorgen Sie das Medium, das frei schwebende Bakterien und verbleibende wirtsabgeleitete Komponenten enthält.

Waschen Sie mit einem Puffer, um lose angesetzte Bakterien zu entfernen.

Fügen Sie eine Färbemischung mit membrandurchlässigen und membranundurchlässigen fluoreszierenden Farbstoffen hinzu und inkubieren Sie im Dunkeln.

Der membrandurchlässige Farbstoff durchquert intakte Membranen und kennzeichnet sowohl lebensfähige als auch nicht-lebensfähige Bakterien. Im Gegensatz dazu gelangt der undurchlässige Farbstoff nur in beschädigte Membranen und markiert selektiv nicht lebensfähige Bakterien.

Nach der Inkubation entfern Sie die Färbungslösung und waschen Sie mit dem Puffer, um überschüssige Farbstoffe zu eliminieren und die Hintergrundfluoreszenz zu reduzieren.

Frisches Medium hinzufügen und Bilder mit Konfokalmikroskopie aufn