JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:27 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer Maus, die mit Antibiotika behandelt wurde, um die Darmmikrobiota zu dezimieren.
Halten Sie die Maus vorsichtig in aufrechter Position, um die Speiseröhre zu verlängern.
Als Nächstes nehmen Sie eine orale Streunadel, die mit einer Spritze verbunden ist, die ein Inokulum aus Sporen enthält, die von Clostridium difficile, einem anaeroben bakteriellen Erreger, stammen.
Führen Sie die Streunadel durch die Seite des Mundes ein und führen Sie sie langsam in die Speiseröhre vor.
Sobald die Nadel die mittlere Speiseröhre erreicht, wird das Inokulum langsam eingesetzt und die Nadel vorsichtig herausgezogen.
Die verabreichten Sporen gelangen durch den Magen in den Dünndarm, wo Gallesalze die Keimung zu vegetativen Bakterien von C. difficile auslösen.
Diese Bakterien wandern in den anaeroben Dickdarm, wo die Erschöpfung der konkurrierenden Mikrobiota die Adhäsion an den Epitheloberflächen, die Vermehrung und die Koloniebildung ermöglicht.
Die kolonisierten Bakterien setzen Toxine frei, die Epithelverbindungen stören und die Darmbarriere schädigen. Diese Barrierenstörung fördert die bakterielle Translokation in tiefere Gewebe und etabliert so die Clostridium difficile Infektion.
In einer laminaren Flow-Haube nehmen Sie eine Subjektmaus und immobilisieren Sie den Kopf, indem Sie das Tier sanft an der lockeren Haut von Hals und Rücken fixieren.
Mit dem Zeigefinger und darauf achtend, dass das Tier keine Laute macht oder Anzeichen von Stress zeigt, immobilisiert den Kopf weiter und verlängert die Speiseröhre. Halten Sie die Maus in einer aufrechten, vertikalen Position und führen Sie die Gavage-Nadel vorsichtig in die Seite des Mundes. Führe die Gavage-Nadel entlang des Gaumendachs und führe sie langsam in die Speiseröhre.
Sobald die Nadel etwa halb in der Speiseröhre ist, spritzen Sie 25 Mikroliter Sporeninokulum und ziehen Sie die Nadel dann vorsichtig heraus. Bringen Sie das Tier zurück in den Käfig und beobachten Sie es auf Anzeichen von Husten oder Atemnot, die auf eine unbeabsichtigte Luftröhrenverabreichung hindeuten könnten.