Quantifizierung von Clostridium difficile in Fäkalproben aus einem infizierten Mausmodell

0 Ansichten3:08 Min. • March 31st, 2026

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Beginnen Sie mit einer Maus, deren Magen-Darm-Trakt von Clostridium difficile, einem anaeroben, sporenbildenden bakteriellen Erreger, besiedelt ist.

Fesseln Sie die Maus und lassen Sie sie natürlich in ein steriles, vorgewichtetes Rohr auskoten.

Bestimmen Sie das Nettogewicht der Fäkalprobe, indem Sie das Gewicht des leeren Rohrs vom Gesamtgewicht abziehen, um geeignete Verdünnungen herzustellen.

Die Probe wird in eine anaerobe Umgebung überführt, um die Lebensfähigkeit des sauerstoffempfindlichen Bakteriums zu erhalten.

Fügen Sie der Probe einen Puffer hinzu und stören Sie sie mechanisch, um ihren Inhalt in die Schwebe freizusetzen.

Inkubieren, damit größere Ablagerungen sich absetzen können, wobei bakterielle Zellen und Sporen im Supernatant erhalten bleiben.

Führen Sie serielle Verdünnungen des Supernatanten im Puffer durch.

Die Verdünnungen auf selektives Medium plattieren und unter anaeroben Bedingungen inkubieren.

Das Medium fördert die Keimung der Sporen und das selektive Wachstum von Clostridium difficile , während es konkurrierende Bakterien hemmt, was zu eigenständigen Kolonien führt.

Zählen Sie die Kolonien, um die Clostridium difficile-Belastung im Stuhl zu quantifizieren und die gastrointestinale Besiedlung zu bewerten.

Um Kotabproben von Mäusen zur Untersuchung zu entnehmen, wird die betroffene Maus zunächst leicht, aber bestimmt an der lockeren Haut am Hals und Rücken festgehalten, um sicherzustellen, dass das Tier nicht in Not ist.

Mit dem kleinen Finger heben Sie vorsichtig den Schwanz des Tieres an, sodass der Anus freigelegt wird. Halten Sie ein steriles Mikrozentrifugenrohr mit bekanntem Gewicht direkt unter dem Anus des Tieres, damit das Rohr die Maus nicht direkt berührt. Wenn das Tier kotet, sammeln Sie die Kotkugel im Rohr.

Lagern Sie das Rohr bei Raumtemperatur, bis alle notwendigen Proben gesammelt sind. Wiegen Sie die Röhren mit Kot auf einer analytischen Skala und zeichnen Sie die Masse bis auf vier Dezimalstellen auf. Berechnen Sie das Gewicht des Kotpellets, indem Sie das Gewicht des Röhrchens subtrahieren.

Als Nächstes berechnen Sie eine Verdünnung von ein bis zehn des Inhalts und pausieren Sie erneut in 1x PBS. Verwenden Sie die Spitze der Pipette, um den Kot vorsichtig in Lösung zu bringen. Inkubieren Sie die Proben 30 Minuten bei Zimmertemperatur, damit der Inhalt absinken kann.

Unter anaerober Pflege der Lösungen führen Sie serielle Verdünnungen für jede Probe in 1x PBS durch. Übertragen Sie 100 Mikroliter jeder seriellen Verdünnung auf TCCCA-Platten. Verwenden Sie einen sterilen L-förmigen Streuer und tragen Sie das Medium gleichmäßig auf die Platten auf.

Inkubieren Sie die Platten unter anaeroben Bedingungen bei 37 Grad Celsius für 24 Stunden. Schließlich werden die C.difficile-Kolonien aufgezählt und die Kolonieeinheit pro Gramm Kotgehalt berechnet.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026