Hochdurchsatzbildgebung der intrazellulären Brucella-Abortus-Infektion in den Epithelzellen des Wirts

Beginnen Sie mit Epithelzellen, in denen die Expression des Interferon-Adaptorproteins, eines wichtigen Vermittlers der angeborenen Immunität, reduziert wurde, wodurch die Zellen anfälliger für Brucella-Infektionen sind.

Ersetzen Sie das Medium durch ein Infektionsmedium, das grünes fluoreszierendes Protein enthält – das Brucella abortus, einen fakultativen intrazellulären Erreger, in der gewünschten Konzentration exprimiert.

Zentrifugiere die Platte, um den Kontakt zwischen Bakterien und Wirtszellen zu fördern, und inkubiere dann, um eine bakterielle Internalisierung zu ermöglichen.

Waschen Sie die Zellen mit einem serumhaltigen Medium und behandeln Sie sie mit einem Antibiotikum, um extrazelluläre Bakterien zu eliminieren.

Inkubieren Sie weiter, damit Brucella sich intrazellulär vermehren kann.

Waschen Sie die Zellen mit einem Puffer und fixieren Sie sie mit Paraformaldehyd, um die intrazellulären Strukturen zu erhalten.

Spüle das überschüssige Fixativ ab. Anschließend wird ein mit Waschmittel ergänzter Puffer hinzugefügt, um die Zellen zu permeabilisieren.

Waschen Sie das restliche Waschmittel ab, fügen Sie dann DAPI hinzu, um die Kerne zu färben, und führen Sie eine letzte Waschung du