JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:32 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit Arabidopsis thaliana-Setzlingen , die auf niedrigdichten Netzstützen gezogen werden, die an der Oberfläche eines flüssigen Wachstumsmediums in einem bodenlosen System schwimmen.
Diese Setzlinge wurden mit Bakterien vorgeimpft, die die Wurzel kolonisieren und einen Biofilm bilden.
Halten Sie den Sämling fest und kneifen Sie vorsichtig den Stängel unterhalb der Blätter mit einer Pinzette.
Dann heben Sie den Setzling aus dem Netz, ohne die Wurzel zu beschädigen, wodurch die kolonisierte Wurzelstruktur erhalten bleibt.
Übertrage den Setzling auf eine Mehrfachbrunnenplatte mit doppelt destilliertem Wasser.
Decken Sie die Platte mit Folie ab und sonizieren Sie die Proben mit einem mehrfachen Sonikator, um den Biofilm zu stören und Bakterien von der Wurzeloberfläche zu lösen.
Nach der Sonikation wird die sonisierte bakterielle Suspension verwendet, um serielle Verdünnungen herzustellen.
Plattieren Sie die verdünnten Proben auf Agarplatten und fügen Sie Glasperlen hinzu, um die Bakterien gleichmäßig zu verteilen.
Entfernen Sie die Perlen und brüten Sie die Platten aus, damit lebensfähige Bakterien Kolonien bilden können.
Die Koloniebildung bestätigt eine erfolgreiche Wurzelbesiedlung durch Bakterien im bodenlosen System.
Nach dem Abspülen werden die Setzlinge aus dem Netz entfernt, indem Sie vorsichtig flammensterilisierte Pinzetten unter die Blätter auf der Blattseite des Netzes legen. Leicht den Stängel kneifen und die Setzlinge vom Netz wegbewegen, um die Wurzel zu lösen, ohne sie zu brechen. Um Bakterien aus den Pflanzenwurzeln zu entfernen, werden die Setzlinge aus jedem Netz in einzelne Brunnen einer 24-Well-Sonikationsplatte mit einem Milliliter doppelt destilliertem Wasser transportiert.
Sonikieren Sie alle Proben innerhalb der Platte auf einmal mit einem mehrfachen Sonikator, wie im Manuskript beschrieben. Um die Bakterien zu quantifizieren, führen Sie serielle 10-fache Verdünnungen der sonikierten Proben im bakteriellen Wachstumsmedium durch. Verbreiten Sie sterile Glasperlen und inkubieren Sie bei der optimalen Temperatur für Bakterien, bis einzelne Kolonien zählbar sind.