JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:00 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit fixierten, immobilisierten und permeabilisierten cyanobakteriellen Zellen, die an einem Deckzettel haften.
Diese cyanobakteriellen Zellen exprimieren wachstumsregulierende Proteine mit geringer Häufigkeit.
Während der hochauflösenden Fluoreszenzbildgebung geben natürliche lichtempfindliche Pigmente in den cyanobakteriellen Zellen eine Hintergrundfluoreszenz ab.
Dies verringert die Bildqualität bei der Visualisierung dieser Proteine mit geringer Häufigkeit.
Um diese Hintergrundfluoreszenz zu minimieren, wird der Deckmantel mit den cyanobakteriellen Zellen in eine Färbeschale gelegt.
Fügen Sie einen blockierenden Puffer mit Serumproteinen hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung während der nachgelagerten Verarbeitung zu verhindern, sowie ein Reinigungsmittel zur Aufrechterhaltung der Zellpermeabilität.
Legen Sie die Färbungsschale auf Eis und setzen Sie die Zellen intensivem Xenonlicht aus.
Das hochintensive Licht initiiert die Photobleaching, indem lichtempfindliche Pigmente abgebaut werden, während wachstumsregulierende Proteine mit geringer Häufigkeit unbeeinflusst bleiben.
Kältebedingungen minimieren hitzebedingte Schäden und bewahren die zelluläre Integrität.
Dieser Prozess ermöglicht eine klare Visualisierung von wachstumsfördernden, wachstumsfördernden Proteinen durch Immunfärbung während der hochauflösenden Fluoreszenzmikroskopie.
Übertrage den gewaschenen Deckdeckel in die Fleckschale.
Füge 50 Mikroliter Blockpuffer oben auf den Deckdeckel hinzu. Legen Sie die gesamte Färbeschale auf Eis und legen Sie sie dann mindestens 60 Minuten unter die Xenon-Lichtquelle zum Photobleichen. Nach dem Photobleaching und Blockieren verwenden Sie den Rand eines Papiertuchs, um den Blockpuffer zu entfernen.