Photobleaching cyanobakterieller Pigmente zur Bildgebung wachstumsregulierender Proteine

Beginnen Sie mit fixierten, immobilisierten und permeabilisierten cyanobakteriellen Zellen, die an einem Deckzettel haften.

Diese cyanobakteriellen Zellen exprimieren wachstumsregulierende Proteine mit geringer Häufigkeit.

Während der hochauflösenden Fluoreszenzbildgebung geben natürliche lichtempfindliche Pigmente in den cyanobakteriellen Zellen eine Hintergrundfluoreszenz ab.

Dies verringert die Bildqualität bei der Visualisierung dieser Proteine mit geringer Häufigkeit.

Um diese Hintergrundfluoreszenz zu minimieren, wird der Deckmantel mit den cyanobakteriellen Zellen in eine Färbeschale gelegt.

Fügen Sie einen blockierenden Puffer mit Serumproteinen hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung während der nachgelagerten Verarbeitung zu verhindern, sowie ein Reinigungsmittel zur Aufrechterhaltung der Zellpermeabilität.

Legen Sie die Färbungsschale auf Eis und setzen Sie die Zellen intensivem Xenonlicht aus.

Das hochintensive Licht initiiert die Photobleaching, indem lichtempfindliche Pigmente abgebaut werden, während wachstumsregulierende Proteine mit geringer Häufigkeit unbeeinflusst bleiben.

Kältebedingungen minimieren hitzebedingte Schäden und bewahren die zelluläre Integrität.

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