Detektion der bakteriellen Antibiotika-Empfindlichkeit mit einem stimulierten Raman-Streumikroskop

Beginnen Sie mit Bakterienproben, die mit steigenden Konzentrationen eines Antibiotikums behandelt wurden, das empfängliche Bakterien eliminiert.

Fügen Sie ein Wachstumsmedium mit Deuteriumoxid und derselben Antibiotikumkonzentration in die entsprechenden Röhren hinzu.

Inkubieren Sie die Röhren unter Schüttelbedingungen.

Deuteriumoxid dringt in Bakterienzellen ein, wo Deuterium in neu synthetisierte Biomoleküle eingebaut wird und Kohlenstoff-Deuterium-Bindungen bildet.

Schleudere die Bakterien, entsorge das Supernatant und wasche.

Fügen Sie ein Fixationsmittel hinzu, um die bakterielle Struktur zu erhalten.

Füge Wasser hinzu, zentrifugiere und entferne das Supernatant.

Die Bakterien wieder aufhängen und die Suspension auf ein poly-L-Lysin-beschichtetes Deckglas übertragen, dann versiegeln Sie es.

Setzen Sie die Probe auf die Bühne eines vorkalibrierten stimulierten Raman-Streu- oder SRS-Mikroskops. Füge Wasser hinzu und senke das Ziel.

Aufnahme von Bildern mehrerer Felder, um die Schwingungsfrequenz von Kohlenstoff und Deuterium zu beurteilen.

Bei höheren Antibiotikakonzentrationen nimmt das Kohlenstoff-Deuterium-Signal ab, was auf eine verminderte bakterielle Lebensfähigkeit hinweist.

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