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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:29 Min. • March 31st, 2026
Nehmen Sie einen Tropfen eines bakteriellen Erregers auf einer Paraffinschicht.
Setze eine Drosophila-Larve in den bakteriellen Tröpfchen.
Unter einem Stereomikroskop verwenden Sie eine Wolframnadel, um die Larve zu stechen und ihre Kutikula, die schützende äußere Schicht und die darunterliegende Epidermis zu durchbohren.
Dies ermöglicht den Eindringen von Bakterien in die larvene Hämolymphe, die Kreislaufflüssigkeit.
Übertragen Sie die infizierten Larven auf eine gerillte, nährstoffreiche Agarplatte mit Hefepaste als Nahrungsquelle.
Die Rillen erleichtern die Larvenwanderung und verhindern Dehydrierung.
Gib die verbleibende bakterielle Suspension auf die Platte und versiegele sie mit einer Paraffinschicht.
Inkubieren Sie die Platte in einer feuchten Kammer, um die Lebensfähigkeit der Larve zu erhalten.
Im Larvenhämolymphe erkennen Immunzellen, sogenannte Hämozyten, die Bakterien und leiten die Phagozytose ein.
Während einige Bakterien nach der Phagosom-Lysosom-Verschmelzung eliminiert werden, überleben andere, indem sie die Fusion verzögern oder intrazellulären Stress widerstehen und sich innerhalb der Hämozyten vermehren, was zu einer anhaltenden intrazellulären Infektion führt.
Die infizierten Drosophila larvae sind nun bereit für Wirts-Pathogen-Interaktionsstudien.
Lege die Hefepaste auf eine Agarplatte mit Traubensaft. Machen Sie einen feinen Schnitt im Agar, wo die Larven wandern können, um das Austrocknen zu vermeiden.
Bauen Sie eine 0,001 Millimeter spitze Wolframnadel mit Haltezange und Paraffinfolie zusammen. Pipette 50 Mikroliter hochtiterhaltiges, mCherry-exprimierendes C. Burnetii auf die Paraffinschicht unter dem Stereomikroskop und die Larven in den Bakterienpool legen. Stich die Larven mit einer Wolframnadel.
Übertragen Sie die Larven auf eine Agarplatte. Übertragen Sie das verbleibende Pathogenmedium auf die Agarplatte und versiegeln Sie die Platte mit einer Paraffinschicht. Lassen Sie die Larven bis zum gewünschten Zeitpunkt nach der Infektion in feuchter Luft auf dem Teller. Lass das C. Burnetii infizierte die Larven 24 Stunden lang auf der Platte.