Hochauflösende konfokale Bildgebung von pathogen-infizierten Drosophila-Hämozyten

Setzen Sie einen Objektträger mit fixierten Hämozyten auf die Bühne des konfokalen Mikroskops.

Diese Hämozyten stammen aus Larven von Drosophila melanogaster und wurden mit einem bakteriellen Erreger infiziert.

Die Hämozyten sind mit einem grünen fluoreszierenden Protein markiert, ihre Kerne mit einem blauen Farbstoff gefärbt, und die Bakterien exprimieren rotes fluoreszierendes Protein zur Visualisierung.

Konfigurieren Sie das Mikroskop so, dass alle drei Fluorophore erkannt werden, um zelluläre Kompartimente und Krankheitserreger gleichzeitig zu verfolgen.

Mit einem hochauflösenden Objektiv fokussieren Sie sich auf den Zielhämozyten, um subzelluläre Details zu erfassen.

Stellen Sie die Laserleistung und die Detektorverstärkungen an, um eine angemessene Abtastbelichtung zu erreichen und die Signalhelderkeit zu optimieren.

Scannen Sie mehrere Z-Ebenen, um sicherzustellen, dass der Expositionspegel angemessen ist.

Stellen Sie die obere und untere Z-Position ein, um die gesamte Hämozyt abzubilden.

Verwenden Sie Scanning-Zoom, um die interessierende Hämozyt zu isolieren und ein hochauflösendes 3D-Bild zu erhalten.

Diese Methode ermöglicht die Visualisierung der Erregerlokalisierung innerhalb des Hämozyten.

Konfigurieren Sie das konfokale Mikroskop für die Dreifarbabbildung von DAPI, EGFP und mCherry.

Setzen Sie die Probe auf das Mikroskop und fokussieren Sie die Probe mit einem 63X/1,4-Zahlen-Aperturobjektiv. Lokalisieren Sie die gewünschten Hämozyten im Sichtfeld für die Bildgebung. Dann passen Sie die Laserleistung und die Detektorverstärkungen an, um die passende Belichtung der Probe zu erreichen.

Überprüfen Sie mehrere Z-Ebenen, um sicherzustellen, dass der Belichtungspegel für die gesamte Probendicke angemessen ist. Als Nächstes finden Sie die obere und untere Position auf der Z-Achse eines gesamten Hämozyten. Stellen Sie diese Positionen als Start- und Endpositionen für die Z-Sektionierung fest.

Verwenden Sie Scanning-Zoom, um den Bereich mit dem Hämozyten zu fotografieren. Sammeln Sie die Bildreihen in der entsprechenden Auflösung, z. B. 1024 mal 1024 Pixel in der X-Y-Ebene und 0,3 Mikrometer Abstand in der Z-Dimension.