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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:36 Min. • March 31st, 2026
Nehmen Sie eine Suspension eines pathogenen Bakteriums, das aus einer infizierten Pflanze isoliert wurde.
Das bakterielle Genom enthält eine transkriptionelle Fusion, bei der der Promotor eines virulenzregulierenden Gens auch die Expression eines nachgelagerten, promoterlosen fluoreszierenden Proteingens vorantreibt.
Während der Pflanzeninfektion löst die Aktivierung des Promotors die Produktion der regulatorischen und fluoreszierenden Proteine aus.
Das regulatorische Protein aktiviert Virulenzgene, während die Fluoreszenz eine messbare Anzeige der Virulenzaktivierung liefert.
Zentrifugiere die Zellen, entsorge den Supernatant und suspendiere dann wieder, um eine konzentrierte Suspension zu erhalten.
Platzieren Sie einen Tropfen auf einen Deckzettel und legen Sie ein Agarose-Pad darüber, um die Zellen zu verteilen und zu immobilisieren.
Nehmen Sie ein Brightfield-Bild auf, um alle Bakterienzellen zu identifizieren, dann ein Fluoreszenzbild, um Einzelzell-Fluoreszenz zu erkennen.
Kombinieren Sie beides, um Unterschiede in der Fluoreszenzintensität zu visualisieren, die Subpopulationen mit hoher, niedriger oder keiner Virulenzgenexpression offenbaren.
Diese phänotypische Variation spiegelt e
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