JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 5:12 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit kleinen Stücken gekühlten Blattgewebes, in denen das Phloem mit einem bakteriellen Erreger infiziert ist.
Setzen Sie die Stücke in einen Mörser mit flüssigem Stickstoff, um die Aktivität der DNA-abbauenden Nukleasen zu hemmen.
Mahlen, um die Zellen mechanisch zu zerstören und intrazelluläre Komponenten freizusetzen.
Verwende einen gekühlten Pfannenwender, um das Pulver zu übertragen, gib Lysepuffer hinzu und wirbel die Suspension vortex.
Inkubieren, um Pflanzenkerne und Bakterienzellen zu lysieren, wobei DNA und RNA freigesetzt werden, während Proteine denaturiert werden.
Fügen Sie RNase hinzu und inkubieren Sie, um RNA abzubauen.
Fügen Sie einen Protein-Präzipitationspuffer hinzu, um die Proteine zu aggregieren, und zentrifugieren Sie dann, um sie zu trennen.
Übertragen Sie den überlagernden Pflanzen- und Bakterien-DNA auf Isopropanol, um die DNA als fadenartige Stränge auszufällen.
Zentrifugieren, um DNA zu sammeln und das Supernatant zu entsorgen.
Mit Ethanol waschen, dann zentrifugieren und das Supernatant entsorgen.
Die DNA an der Luft trocknen, dann einen Rehydrationspuffer hinzufügen und inkubieren, um sie aufzulösen.
Die DNA-Proben sind nun bereit für den nachgelagert
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