Dissection of Human Glaskörper Elemente für Proteomanalyse

Das Glaskörper ist eine optisch klare extrazelluläre Matrix, die den Augeninnenraum füllt. Es kann in mehrere Unterstrukturen unterteilt werden, einschließlich des vorderen Hyaloids hinter der Linse, der Glaskörperbasis an der vorderen Netzhaut, des Glaskörperkortex, der eine elastische Hülle bildet, und des Glaskörperkerns in der Mitte. Um den Glaskörper zu sezieren, müssen wir zunächst das vordere Augensegment entfernen.

Eine super scharfe Klinge wird verwendet, um die Hornhaut am Limbus einzuschneiden. Dann werden Hornhaut-Sklera-Zange verwendet, um die Hornhaut direkt vor dem Limbus zu schneiden. Die Iris wird mit gebogenen Scheren präpariert, indem sie von ihrer Vorderseite weggezogen wird.

Sanftes Drücken auf den Bulbus kann den Kern ausstoßen. Um den Glaskörperkern zu entfernen, verwenden Sie eine 23-Gauge-Nadel an einer fünf-cc-Spritze und aspirieren Sie den größtenteils flüssigen Glaskörper. Das vordere Hyaloid wird sichtbar als dünne transparente Membranstruktur, die mit einer Pinzette gegriffen werden kann.

Es ist eine elastische Struktur direkt hinter der Linse. Der innere Kreis ist das Ligamentum hyaloideum. Van-Scheren werden verwendet, um das Hyaloid zu schneiden, während eine Pinzette Zugkraft ausübt.

Lat-Gewebe kann auf ein Afu-Röhrchen übertragen werden und die Manöver wird wiederholt, bis das gesamte Gewebe präpariert wurde. Um auf die verbleibenden Glaskörperunterstrukturen zuzugreifen, ist es notwendig, das Auge mit gebogenen Westcott-Scheren zu öffnen. Jeder der Lappen wird mit einer Pinzette in eine Petrischale umgedreht.

Dieses Bild zeigt die Anatomie der Glaskörperbasis, ein dünnes, transparentes Gewebe, das die Aura serrata überbrückt. Die Aura serrata ist die Trennlinie zwischen dem Ziliarkörper vorne und der Netzhaut hinten. Im Gegensatz zu anderen Teilen des Glaskörpers ist die Glaskörperbasis fest am darunterliegenden Ziliarkörper und der Netzhaut haftend, sodass ein Zug mit der Pinzette das Gewebe tatsächlich anhebt.

Um die Glaskörperbasis zu isolieren, entfernen wir zunächst die Pars plata mit einer Pinzette und Westcott-Scheren. Die Pars plata ist dieser kleine Bereich mit Leisten. Dann, um die Glaskörperbasis zu isolieren, schneiden Sie zwei bis drei Millimeter hinter der Aura mit Westcott-Scheren, während Sie das Auge mit einer Pinzette stabilisieren, halten Sie die Glaskörperbasis mit einer Pinzette und ziehen Sie Zug, während Sie sequenziell mit Westcott-Scheren schneiden.

Es entsteht ein Perlenketten-Aussehen, wenn die Glaskörperbasis exzidiert wird, und es kann beobachtet werden, wie diese extrazelluläre Matrix Proteine compartimentieren könnte. Verschiedene Techniken können verwendet werden, um die Hülle des Glaskörpers zu sezieren. Der Kontakt mit einem WEX-Zellschwamm hebt den Cortex an.

Ein Rand des Cortex kann zwischen den Blatten gefunden werden, wie hier gezeigt. Verwenden Sie erneut die Pinzette, um Zug zu erzeugen, und finden Sie VanNess-Scheren, um den Glaskörperkortex sequenziell zu schneiden. Der Cortex kann auch vom Disc abgehoben werden, und hier werden größere Westcott-Scheren verwendet, um den Cortex zu sezieren, während er vorsichtig von der Oberfläche der Netzhaut abgezogen wird.

Proben können dann in ein Mikro gegeben und für spätere proteomische Analysen aufbewahrt werden.