Herstellung von Pseudoviren mittels Plasmid-Transfektion in menschlichen Zellen

Beginnen Sie mit einem Kulturkolben, der humane embryonale Nierenzellen in einem nährstoffreichen Medium enthält.

Ersetzen Sie das Medium durch frisches Medium, das Chloroquin enthält, um die Plasmidübertragung in die Zellen zu verbessern.

Nehmen Sie eine Mischung aus Plasmiden, die Influenza-Oberflächenproteine, lentivirale Kernproteine und das lentivirale Genom kodieren, zusammen mit Calciumphosphat. Inkubieren Sie, um Calciumphosphat–DNA-Komplexe zu bilden.

Fügen Sie die Mischung den Zellen hinzu und mischen Sie vorsichtig. Inkubieren Sie, um dem Komplex den Eintritt in die Zellen über Endozytose zu ermöglichen. Chloroquin fördert die endosomale Freisetzung der Plasmid-DNA.

Innerhalb der Zelle induziert die Plasmid-DNA die Expression sowohl von Influenza- als auch von Lentiviralbestandteilen.

Ersetzen Sie das Medium, um überschüssige Komplexe zu entfernen.

Brüten Sie, um die Assemblierung der viralen Komponenten und deren Ablösung als Pseudoviren zu ermöglichen, die in das Kulturmedium freigesetzt werden.

Sammlen Sie das Medium, das die Pseudoviren enthält, und zentrifugieren Sie es, um zelluläre Trümmer zu pelletieren.

Sammeln Sie das pseudovirushaltige Überstandmedium und lagern Sie e