JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:24 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit dem Auge einer transgenen Maus, der zuvor ein adeno-assoziiertes Virus (AAV) verabreicht wurde, das das Gen der Interesse trägt und ein fluoreszierendes Protein kodiert.
Die Maus fehlt ein Gen, das für die Aufrechterhaltung der Integrität der inneren Limitansmembran (ILM) essentiell ist, einer Barriere, die die Netzhaut von der Glaskörperhöhle trennt.
Der Verlust dieses Gens imitiert eine Netzhautdegeneration, wodurch das Virus tiefer in die Netzhautzelllagen eindringen kann.
Infizierte Netzhautzellen exprimieren das Gen von Interesse und produzieren fluoreszierende Proteine, wodurch sie fluoreszieren können.
Nun wird das Auge disseziert und die Hornhaut sowie die Linse entfernt.
Lösen Sie die Netzhaut vorsichtig vom retinalen Pigmentepithel (RPE) und von der Sklera, der äußeren Augenschicht.
Das Gewebe in Fixierungslösung eintauchen.
Mit Phosphatpuffer waschen, um restlichen Fixator zu entfernen.
Wenn man die fluoreszierenden retinalen Zellen unter einem konfokalen Mikroskop betrachtet, deutet die Fluoreszenz auf eine erfolgreiche virale Durchdringung der geschädigten inneren Begrenzungsmembran hin.
Um die Dissektion für retinale Flachpräparate zu erleichtern, fixieren Sie
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